人源阳离子抗菌肽hCAP-18真核表达载体的构建与表达.pdfVIP

维普资讯 中国生物制品学杂志2007年2月第 20卷第 2期 ChinJBiologicalsFebruary2007，Vo1．20No．2 ·87 · 中国圈书分类号 QTS6 文献标识码 A 文章编号 lOO4-sso3(7,oo7)o2．o~．o4 【基础研究】 人源阳离子抗菌肽 hCAP-18真核表达载体的构建与表达 袁红艳 韩艳非 朱明光 杨巍 常雅萍 【摘要 】 目的 构建人源性阳离子抗菌肽hCAP．18的真核表达载体 pcDNA4／Myc—His—hCAP一18，转染真核细胞，并检测 其表达。方法 以正常人外周血中性粒细胞的总 RNA为模板 ，用 RT-PCR技术钓取hCAP一18编码序列的全长 cDNA，并克隆 至pcDNA4／Myc．His真核表达载体上，转染真核细胞株HeLa。RT-PCR及Westernblot方法检测 目的基因的表达。结果 所构 建的真核表达载体 pcDNA4／Myc—His—hCAP一18，经酶切鉴定所释放片段大小与预期相符 ，基因序列与GenBank上登录的序列一 致，目的基因在转染细胞中获得高水平表达。结论 已成功构建真核表达载体pcDNA4／Myc—His—hCAP一18，并在转染细胞中高 效表达。 【关键词】 抗菌肽；基因转染；真核表达 ConstructionofEukaryoticExpressionVectorforHumanCationicAntimicrobial Peptide(hCAP-18) YUANHong—yan，HANYah—fei，ZHUMing—guang，etal(DepartmentofImmunology，SchoolofBasicMedicalSci— e ，JilinUniversity，Changchun130021，China) 【Abstract】 Objective Toconstructaeukaryoticexpressionvectorforhumancationicantimicmbialpeptide(hCAP一18)and determinetheexpressedp~ uct．M ethods Amplifyhterid1一lengthcDNA encodinghCAP一18byRT—PCRusing htetotalRNA ofneu— trophilsofh~ thyhumanperipheralblood鹪 templateandcloneintoeukaryotieexpressionvectorPODNA4／Myc—His．TransfecthteCOn- structedrecombinantplasmidpcDNA4／Myc—His—hCAP一18toHeLacells，identifyhtetargetgenebyRT—PCR nadhteexpressedproduct byWe．stem blot．Results Thelengthofclonedgenefragmentw聃 consistentwiht thatexpected，naditssequencew聃 identicaltohtat reportde inGenBank．Th erecombinnatproteinwiht arelativemolecularweightof20000WaSexpressedintransfectedcells．Conclusion EukaryoticexpressionvectorpcDNA4／Myc—His—hCAP一18w聃 successfullyconstructed．nadhCAP-18washighlyepxressedinUansfect— de cells． K【eywords】 Antimierobialpeptide；Genetransfection；Eukaryoticepxression 近年来的研究发现，内源性的抗菌肽能够有效 医学科学院三所惠赠；pMDI8一T载体为 TaKaRa公 杀灭细菌、病毒等微生物，而很少发生耐药，应用内 司产品。 源性抗菌肽开发新的生物制剂已成为近年来的研究 2．主要试剂 热点。hCAP一18／LL-37是