酶工程第三章.pptVIP

第五节 动、植物细胞发酵产酶 动物细胞培养方法可分成两大类。一类是来自血液、淋巴组织的细胞、肿瘤细胞和杂交瘤细胞等，可以采用悬浮培养。另一类是存在于动物复杂的器官中的细胞，与其周围的细胞互相依存，即有所谓“定位依存”关系，这一类细胞不宜采用悬浮培养，而必须依附在固体或半固体的表面才能生长和进行正常的新陈代谢。定位依存关系的细胞一般采用固定化细胞培养方式。 第三节 发酵工艺条件及控制 可见添加诱导物对提高酶产量有非常显著的效果。进一步研究和开发高效廉价的诱导物有着重要的意义和应用前景。 2．控制阻遏物浓度 如前所述，有些酶的生物合成受到阻遏物的阻遏作用。为了提高酶的产量，必须设法解除阻遏作用。 阻遏作用有产物阻遏和分解代谢物阻遏两种。阻遏物可以是酶催化反应产物，代谢途径的末端产物以及分解代谢物（葡萄糖等容易利用的碳源）。 控制阻遏物浓度是解除阻遏、提高酶产量的有效措施。 第三节 发酵工艺条件及控制 3．添加表面活性剂 表面活性剂可分为离子型和非离子型两大类。离子型表面活性剂又有阳离子型、阴离子型和两性离子型之别。 由于离子型表面活性剂有些对细胞有毒害作用，特别是季胺型离子表面活性剂（如“新洁尔灭”等）是消毒剂。不能用于酶的发酵生产。 非离子型表面活性剂，如：吐温（Tween）、特里顿(Triton)等，可积聚在细胞膜上，增加细胞的通透性，有利于酶的分泌，所以可增加酶的产量。例如，在霉菌发酵生产纤维素酶的培养基中，添加1%的吐温，可使产酶量提高1-20倍。在使用时，要注意表面活性剂添加量，过多或过少都效果不好，应控制在最佳浓度范围内，此外，添加表面活性剂有利于提高某些酶的稳定性和催化能力。 第三节 发酵工艺条件及控制 4．添加产酶促进剂 产酶促进剂是指可以促进产酶、但作用机理并未阐明清楚的物质。添加产酶促进剂往往对提高酶产量有显著效果。例如，添加植酸钙镁可使霉菌蛋白酶和桔青霉磷酸二酯酶的产量提高1-20倍。添加聚乙烯醇(Polyvinyl alcohol)可提高糖化酶的产量。聚乙烯醇、醋酸钠等对提高纤维素酶的产量也有效果等。产酶促进剂对不同细胞、不同酶的作用效果各不相同，要通过试验选用适当的产酶促进剂并确定一个最适浓度。 第四节 固定化细胞发酵产酶 固定化细胞又称固定化活细胞或固定化增殖细胞，是指用各种方法固定在载体上又能进行生长、繁殖和新陈代谢的细胞。 固定化细胞是20世纪70年代后期才发展起来的技术，有关细胞固定化方法及其特性，留待本书第六章阐述。本节仅介绍其发酵产酶的特点。 固定化细胞产酶是从1978年开始的，十几年来，国内外均开展了大量研究，取得了可喜进展。利用固定化细胞发酵生产α-淀粉酶、糖化酶、蛋白酶、果胶酶、纤维素酶、溶菌酶、天冬酰胺酶等胞外酶的研究均取得了成功。 第四节 固定化细胞发酵产酶 固定化细胞又称固定化活细胞或固定化增殖细胞，是指用各种方法固定在载体上又能进行生长、繁殖和新陈代谢的细胞。 固定化细胞是20世纪70年代后期才发展起来的技术，有关细胞固定化方法及其特性，留待本书第六章阐述。本节仅介绍其发酵产酶的特点。 固定化细胞产酶是从1978年开始的，十几年来，国内外均开展了大量研究，取得了可喜进展。利用固定化细胞发酵生产α-淀粉酶、糖化酶、蛋白酶、果胶酶、纤维素酶、溶菌酶、天冬酰胺酶等胞外酶的研究均取得了成功。 第四节 固定化细胞发酵产酶 一、固定化细胞生长 固定化细胞在适宜的条件下培养时，固定在载体上的细胞以一定的速度生长，在达到平衡期以后的相当长的一段时间内，固定化细胞的浓度基本上保持恒定。同时，随着固定化细胞的生长和增殖，有一些细胞泄漏到培养液中，这些泄漏细胞如同游离细胞一样，在培养液中生长繁殖。 根据10多年来的大量试验结果，固定化细胞发酵生产胞外酶具有如下显著特点： 1．提高产酶率 细胞经固定化后，在一定的空间范围内生长繁殖，细胞密度增大，故可加速生化反应，提高产酶率。例如，固定化枯草杆菌细胞生产α-淀粉酶，在分批发酵时，其体积产酶率（又称产酶强度）达到游离细胞的122%，在连续发酵时，产酶率更高（表3-1）。固定化细胞的比产酶速率（εg）较游离细胞比产酶速率（εf）高。 第四节 固定化细胞发酵产酶 表3-1不同发酵方式对α-淀粉酶产酶率的影响 第四节 固定化细胞发酵产酶 2.可在高稀释率条件下连续发酵 固定化细胞固定在载体上,不容易脱落流失,可反复使用多