出口动物组织中多种抗病毒类药物残留量的测定 送审稿.docVIP

ICS 备案号：前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：本标准系首次发布的中华人民共和国出入境检验检疫行业标准。出口动物组织中抗病毒类药物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 2 规范性引用文件 下列文件注日期的引用文件，GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 方法提要 样品中残留的经溶液提取混合型阳离子交换固相萃取柱。4 试剂和材料 二甲基亚砜25％～28％。 4.7 乙酸铵：色谱级。 4.8 三氯乙酸溶液(20 g/L):称取20 g三氯乙酸（4.4），溶于1 L 水。混合型阳离子交换固相萃取柱mantadine，CAS No.768-94-5）、金刚乙胺（rimantadine，CAS No.1501-84-4）、美金刚（memantine，CAS No.41100-52-1）、阿昔洛韦（acyclovir，CAS No.59277-89-3）、咪喹莫特（imiquimod，CAS No.99011-02-6）、吗啉胍（moroxydine，CAS No.3731-59-7）、奥司他韦（oseltamivir，CAS No.196618-13-0）纯度均大于98.0％；同位素内标标准物质：金刚烷胺_D6，金刚乙胺_D6, 阿昔洛韦_D4纯度均大于99.0％。 4.14 标准储备液（100μg/mL）：准确称取适量的金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚、阿昔洛韦、咪喹莫特、吗啉胍、奥司他韦以及同位素内标标准品，用甲醇分别配制成100μg/mL的标准储备液，阿昔洛韦先用少量二甲基亚砜4.18 基质标准工作溶液：以空白基质溶液将混合标准储备液与内标工作液稀释至适当浓度。 4.19 混合阳离子交换固相萃取小柱：60mg/3 mL，使用前依次用3 mL甲醇，3 mL水和3 mL2％甲酸活化，保持柱体湿润。 4.20 滤膜：0.22μm，有机系。 5 仪器和设备 r/min。 离心机：5000 r/min。 漩涡振荡器。 pH计。 5.8 氮吹仪。 5.9 固相萃取装置。 6 试样制备 7 分析步骤 7.1 g试样（精确至0.01 g）于50 mL 的离心管中，加入0.1mL 内标标准工作溶液（0.1μg/mL），加入15 mL三氯乙酸溶液(4.9)，加盖后漩涡3 min，4℃条件下15000 r/min离心5 min，取出上清液，再加入10 mL三氯乙酸溶液(4.9)重复提取一次，离心后合并上清液定容至25 mL的容量瓶中。 7.2 净化 准确移取5 mL上清液，加入到活化过的混合阳离子交换固相萃取小柱，依次用5 mL 2％( V/V)甲酸溶液、3 mL 1％甲酸乙腈( V/V)淋洗；然后真空抽干5 min，4.0 mL 洗脱溶液（4.11）洗脱至10 mL玻璃管中，在50℃用氮气浓缩仪吹至近干。准确加入1.0 mL乙腈-甲醇-水(体积比 70:10:20)溶液溶解残渣，涡旋30 s后过0.22 μm 滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。此样液应在48 h内测定完毕。 7.3 空白基质溶液的制备 称取阴性样品5 g（精确至0.01 g），按7.1和7.2步骤操作。 标准校正曲线制备 分别准确移取ng/mL混合标准溶液0 mL0.025 mL、0.050 mL、0.10 mL、0.25 mL和100 ng/mL混合标准溶液0.050 mL个50 mL离心管中，a） 色谱柱：带酰胺基团的亲水相互作用色谱柱BHE Amide2.1mm x 100mm, 5μm），或相当者； b） 流动相： A为5mmol/L乙酸铵溶液（含0.2%甲酸Time（min） A （%） B（%） 0 5 95 2 5 95 4 30 70 5 60 40 6 5 95 10 5 95 c）流速：0.4 mL/min； d）柱温：30 ℃； e）进样量: 2μL。 7.5.2 质谱条件： a）离子源：电喷雾源（ESI），正离子模式； b）监测模式：多反应监测（MRM）； c）其他参考质谱条件参见附录A.1。 7.5.3.1 定性测定 每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间与混合基质标准校准溶液中对应浓度标准校准溶液的保留时间偏差在±2.5%之内；且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的混合基质标准校准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。 表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 ＞50% ＞20%至50% ＞10%至20%