进出口食品中致病微生物分子分型 MLST法 编制说明.docVIP

出入境检验检疫行业标准编制说明（模版表） 1 基本信息 1.1 标准名称 中文 进出口食品中致病微生物分子分型 MLST法 英文 1.2 与国际标准和国外先进标准一致程度情况 □等同 □修改 □非等效 标准号 英文名称 中文名称 说明 （适用于修改和非等效） 1.3 任务来源 批准文号 计划编号 2012B143 1.4 制（修）订情况 √制订 □修订 修订标准编号 整合标准编号 1.5 起止时间 2012年 1 月～ 2014 年 12 月 1.6 主要起草单位 中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、中国食品安全风险评估中心、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、上海交通大学、中华人民共和国北京出入境检验检疫局、中华人民共和国珠海出入境检验检疫局、中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中华人民共和国吉林出入境检验检疫局、中华人民共和国陕西出入境检验检疫局 1.7 主要起草人 蒋原、薛峰、陈颖、郭云昌、王娉、郑文杰、曾静、冯家望、吕敬章、许龙岩、王涵、王振国、史贤明 1.8 专业类别 □管理；□动物检疫；□植物检疫；√食品检验；□卫生检疫；□化矿金；□机电；□轻工；□纺织；□包装与危化；□鉴定 1.9 标准体系表代码 1.10 调整情况 题目改为“出口食品中XX细菌分子分型 MLST法”，为系列标准，现举例，子标准为“出口食品中空肠弯曲菌分子分型 MLST法” 2 背景情况 2.1 国内外现行法律法规要求，国际贸易、疫病疫情、质量安全等检验检疫业务需求情况 通过对进出口食品中致病微生物分子分型方法的研究，有利于准确鉴定致病病原菌。是解决重大食品安全事件重要的溯源手段，以达到尽量减少损失，有效控制疾病蔓延和传播的目的。目前，一般的检测手段只能实现检测细菌本身，无法从分子生物学层面上精确鉴定致病菌的致病特性，且标准化程度不高，不利于调查与控制如2011年由肠出血性大肠杆菌引起的德国毒黄瓜事件等食源性疾病的爆发。 传统的细菌分型方法一般依靠生化反应、血清学、噬菌体分型等表型分型方法,不能用于菌株的相关性分析。分子分型的方法与传统的分型方法相比，具有检测速度较快，结果比较客观，可以实现大批样品的快速检测等优点。区分能力强、重复性好、结果稳定、易于标准化,被广泛应用于很多种细菌的分子流行病学研究中,能够用于分析菌株之间的相关性,协助追踪感染来源,在控制传染病疫情方面发挥重要作用。开展重要食源性致病菌基因分型技术研究，实现不同来源的食源性致病菌分子分型结果的比对和鉴定。为病原学上提供来自病例和可疑食品、媒介、环境等的致病菌分离株相关性的实际证据。为早期识别、监视和预警食源性疾病暴发，参与调查步骤和预防策略提供基础数据和依据。 近年来，随着分子牛物学技术快速发展，新的检测技术和方法不断涌现并广泛应用于食品微生物的检测，为食源性病原微牛物的致病性、流行性、变异性以及耐药性分析等方面提供了重要的信息。由于致病微生物分型溯源方法的稳定性和分辨力是该项技术的难点，因不同的分型方法研究的着眼点不同, 各有其优缺点，适用于不同的致病微生物种属和溯源要求，选取合适的分型方法，建立可对同种不同群微生物分型溯源的分子分型方法。多位点序列分型 随着DNA测序技术的快速发展，分子分型日益趋向于染色体的单一或多个位点的多态性上。MLST分型是指测定对多个管家基因中长度约为470 bp的核心片段的核苷酸序列，对其组合进行索引编号，不同的菌株对应不同的序列型，从而揭示菌株间等位基因的多样性。MLST分型中多个管家基因的序列分析比较在实验过程的操作性与结果的可靠性之间取得了平衡，且结果准确，所得数据在不同的实验窜问具有良好的可比性，即MLST对菌株具有较强的种内分辨力，有研究表明，MLST分型的分辨力较PFGE更强，但MLST的缺点是它的高额费用和操作过程所需的特定仪器。这使得这项技术只能局限在大型的全球性流行病学研究中心使用，影响其在基层推广普及。本实验室近年来联合中国疾控中心营养与食品安全研究所、中国检验检疫科学研究院等部门联合开展有关MLST分子分型技术的标准化研究，有一定的研究基础，本系列标准拟建立标准化的进出口食品中重要致病微生物分型：沙门氏菌、志贺氏菌、大肠埃希氏菌O157：H7、阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、单増李斯特氏菌、空肠弯曲菌、单增李斯特菌等重要食源性致病菌的MLST分型法。MLST分型是指测定对多个管家基因中长度约为470 bp的核心片段的核苷酸序列，对其组合进行索引编号，不同的菌株对应不同的序列型，从而揭示菌株间等位基因的多样性。MLST分型中多个管家基因的序列分析比较在实验过程的操作性