胃癌组织来源的突变型dna聚合酶β的碱基切除修复功能.pdfVIP

.. ... .. 胃 癌 组 织 来 源 的 突 变 型 DNA聚 合 酶 β 的 碱 基 切 除 修 复 功 能 张成娟1. 2 赵四敏2 赵国强3 董子明2 1. 河南省肿瘤医院病理科，河南郑州450003 ；2. 郑州大学基础医学院病理生理学教研室，河南郑州450001 ； 3. 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室，河南郑州 450001 摘要：目的 研究胃癌组织中野生型和突变型DNA聚合酶β在DNA修复过程中的作用，为进一步探讨肿瘤的病因 发病学奠定基础。方法 采用聚合酶链反应( PCR) 和分子克隆技术，以野生型和突变型DNA聚合酶β基因为模板， 扩增后构建pGEM- T- pol β克隆载体，经PCR筛选，亚克隆于pET28a( +) 表达载体中，并转化至大肠杆菌BL21( DE3) 感受态细菌，经诱导剂异丙基- β- D- 硫代半乳糖苷( I PTG) 诱导表达后，通过镍柱亲和层析法纯化蛋白。设计3 条单链 DNA引物，退火合成含有单碱基缺失的DNA底物，与纯化蛋白共做碱基切除修复( BER) 实验，最后琼脂糖凝胶电泳 鉴定。结果 成功构建了pET28a ( +) - pol β重组表达载体；在BER实验中，野生型DNA聚合酶β能够在DNA底物 的酶切位点处将其切开，突变型DNA聚合酶β不能或部分将其切开。结论 野生型DNA聚合酶β能够修复单碱基 缺失的DNA底物，而突变型DNA聚合酶β在碱基缺失修复过程中的作用丧失或减弱。 胃癌；DNA聚合酶β；I PTG诱导；镍柱亲和层析；碱基切除修复 R73 0 . 2 A 1671- 8259( 2011) 06- 0672- 05 The f unct i on of bas e exci s i on r epai r of t he mut ant DNA pol ymer as e β i n human gas t ri c cancer t i s s ues ZHANG Cheng-j uan ZHAO Si - mi n ZHAO Gu o- q i an g DONG Zi - mi ng 2010- 12-27 2011- 01- 18 张成娟（1981- ），女（汉族）, 医学硕士. 研究 向：食管癌的防治 . E-mai l ：zhangchengj uan@ yahoo. com. cn .. ... .. 6期 .. ... .. 第 弛 卷 .. ... .. 6期 .. ... ..