进出口果实与种子类中药材中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯的测定方法.docVIP

前 言 本标准是按照GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写的规则》和GB/T 20001.4-2001《标准编写规则 第4部分：化学分析方法》起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国重庆出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局。 本标准主要起草人： 出口果实与种子类中药材中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯含量的测定 液相色谱法 范围 本标准规定了出口果实与种子类中药材中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯含量的液相色谱测定方法。 本标准适用于出口果实与种子类中药材五味子、陈皮、枸杞、苦杏仁、决明子、山茱萸、豆蔻和牛蒡子中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯含量的测定。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 方法提要 试样中富马酸单甲酯和富马酸二甲酯用乙酸乙酯提取，提取液经离心、过滤、浓缩后，经氨基复合石墨碳柱固相萃取分离、净化，淋洗液经浓缩、定容后，用液相色谱仪测定，外标法定量。 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。 甲醇：色谱纯。 乙酸乙酯：色谱纯。 冰乙酸：色谱纯。 磷酸。 无水硫酸钠：650 ℃灼烧4 h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。 0.05%磷酸：移取0.5 mL磷酸，用水稀释至1000 mL。 液相色谱流动相：甲醇-0.05%磷酸（35+65，V/V）。 冰乙酸-乙酸乙酯溶液：冰乙酸-乙酸乙酯（2+98，V/V）。 富马酸单甲酯标准品（Methyl hydrogen fumarate，C5H6O4，CAS No. 2756-87-8）：纯度大于等于99%。 富马酸二甲酯标准品（Dimethyl fumarate，C6H8O4，CAS No. 624-49-7）：纯度大于等于98%。 富马酸单甲酯标准储备液：准确称取适量富马酸单甲酯（4.9）标准品，用甲醇配制成1000 (g/mL的单个标准储备溶液，0 ℃ ~ 4 ℃保存，有效期6个月。 富马酸二甲酯标准储备液：准确称取适量富马酸二甲酯（4.10）标准品，用甲醇配制成1000 (g/mL的单个标准储备溶液，0 ℃ ~ 4 ℃保存，有效期6个月。 混合标准中间液（10 (g/mL）：分别移取1.00 mL富马酸单甲酯储备液（4.11）和富马酸二甲酯标准储备溶液（4.12）于100 mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，0 ℃ ~ 4 ℃保存，有效期1个月。 混合标准工作溶液：临用前取适量10 (g/mL混合标准中间液（4.13），用流动相（4.7）稀释成0.025、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0和5.0 μg/mL的标准工作液。 氨基复合石墨碳固相萃取柱：各0.5 g，6 mL，或相当者。使用前用10 mL甲醇、10 mL冰乙酸-乙酸乙酯溶液（4.8）活化，保持柱体湿润。 微孔滤膜：0.22 μm，有机系。 仪器和设备 高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。 分析天平：感量0.0001 g、0.01 g。 高速粉碎机。 二号筛：24目，850 μm±29 μm。 振荡器。 离心机：转速不小于7000 r/min。 固相萃取装置。 氮吹仪。 减压旋转蒸发器。 具塞离心管：50 mL。 浓缩瓶：150 mL。 试样制备与保存 五味子、陈皮、苦杏仁、决明子、豆蔻、牛蒡子等 取不少于200 g样品，用高速粉碎机粉碎，过二号筛，取通过筛网的药材粉末装入洁净的容器内，密闭并标明标记，于0 ℃ ~ 4 ℃保存。 枸杞、山茱萸等 取不少于200 g样品，装入洁净样品袋中在-18 ℃冷冻2h以上，取出后迅速进行高速粉碎，粉碎后的样品再装入洁净容器内，密闭并标明标记，于-18 ℃保存。 测定步骤 提取 称取2.5 g（精确至0.01 g）试样于50 mL离心管中，加入5 g无水硫酸钠和20 mL乙酸乙酯，振荡提取30 min，7000 r/min离心5 min，将上清液过滤至150 mL浓缩瓶中，用20 mL乙酸乙酯再重复萃取1次，合并萃取液，于35 ℃减压浓缩至约1 mL，加入4 mL冰乙酸-乙酸乙酯（4.8），待净化。 净化 将7.1所得待净化溶液全部转移至活化好的氨基复合石墨碳固相萃取柱（4.14）中，收集流出液，并用5 mL冰乙酸-乙酸乙酯（4.8）分两次洗涤浓缩瓶，洗涤液合并上柱，再用5 mL冰乙酸-乙酸乙酯（4.8）淋洗固相萃取柱，整个净化过程保持