实验三培养组织的观察.pptVIP

* * 实验三 培养组织的观察 实验器材 倒置相差显微镜、显微摄影装置 在培养5～6d后，把培养瓶置于倒置相差显微镜下观察，可见有细胞从组织块周边生长，呈放射状排列。 实验步骤: 注意事项 组织培养中常见的污染物有细菌、酵母菌、真菌和支原体，其来源或由培养物自身携带或由培养物以外的环境污染。微生物污染培养细胞的特征主要有： 培养液的酸碱度发生异常的改变，大多数情况下培养液的PH下降； 培养液呈现混淆状，有时在培养液的面上出现薄膜或泡沫，或者出现许多微小点子，当摇动培养瓶时则散开； 光镜（100倍）观察，在细菌感染后，在细胞间的空隙出现有颗粒，有较小形的出牙颗粒。真菌感染则可见许多细丝状菌丝，有时还密集有集群孢子。 培养细胞的生长和增殖： 游离期：细胞接种后从悬浮状态到细胞贴瓶； 生长期：指数生长期，可用细胞分裂指数即每千个细胞的分裂细胞数来表示，一般情况为0.2-0.5%。 停止期：细胞密度已饱和，细胞停止增殖，但代谢活动仍在进行。 培养结果的检测 一、组织细胞的分型： 根据细胞与容器之间是否相贴可把培养细胞分为贴附型和悬浮型。多数细胞属于贴附型，贴附在培养瓶壁上生长，常失去原有形态而出现类似于“返祖”的现象，大致有如下几种： 成纤维细胞型：与体内成纤维细胞的形态相似，胞体呈梭形或不规则△，核卵圆形，胞质外伸2～3个突起。细胞生长呈放射状、火焰状或漩涡状走行。除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞核血管内皮常呈本型。在营养状况不良的情况下培养出来的其他类型细胞也会转成本型。 *