化学品 鱼类生殖毒性试验方法.docVIP

前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准等同采用经济合作与发展组织(Organization for Economic Cooperation and Development, OECD) TG 229: Fish Short Term Reproduction Assay《鱼类短期生殖毒性测试》(英文版)，其有关的技术内容与上述方法一致。 本标准进行了下列编辑性修改： ——删除了原文中的介绍、报告、参考文献、附录1和附录3-5部分； ——将原文中附录2的一部分内容修改为标准文本的“5 试剂和材料”和“6 测试条件”； ——用“本标准”代替“本试验方法”。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：程艳，崔媛，谢文平，陈会明，马萍，李晞。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 化学品 鱼类生殖毒性试验方法 1 范围 本标准规定了化学品鱼类生殖毒性试验方法鱼类生殖毒性OECD TG 229 鱼类短期生殖毒性测试 (Fish Short Term Reproduction Assay) 3 方法原理 本描述了一种体内筛选测试方法，性成熟的雄鱼和处于产卵期的雌鱼放在一起，在其生命周期中暴露于化学品一段有限的时间(21天)。在21天暴露期结束时，根据所用物种，在雄性和雌性鱼上对一种或两种生物标志物终点进行测试，作为测试化学物质的指标。这些测试终点包括卵黄蛋白原Vitellogenin, VTG)、第二性特征。温度控制仪器，最好能够连续监控化学惰性材料器皿天平(精确至± 0.5mg)黑头呆鱼Fathead minnow (Pimephales promelas)青鳉鱼Medaka (Oryzias latipes)斑马鱼Zebrafish (Danio rerio)鱼的 5.2.1 受试鱼应从实验室群体鱼中选择，最好是从一个单独的群体中选择，此群体在测试前应已在与测试所用的水质和照明条件相似的条件下至少适应两周。大约湿重(g)雌性1.5±20%雄性2.5±20%青鳉鱼雌性0.35±20%雄性0.35±20%斑马鱼雌性0.65±20%雄性0.4 ±20%在适应期间、预暴露期间或者暴露期间，鱼不应接受疾病治疗。 经过48的适应期，记录死亡率并根据下列标准判定是否接受该鱼群： 在7天内群体的死亡率大于10％：舍弃整群 5.2.4.2 群体死亡率在5％至10％：额外适应7天时间；如果死亡率在第二个七天超过5％，舍弃整群 5.2.4.3 在7天内的群体死亡率小于5％：接受群体。 测试溶液 所选择浓度的测试溶液由储备液稀释而成。储备液最好通过使用机械方法(如搅拌或超声波溶解)，将受试物质简单的混合或搅拌在稀释水中。如要使用溶剂，则应设置平行的溶剂对照且溶剂浓度应与化学处理组相同。在6.5-8.5之间，在给定的测试期间应该在±0.5 pH值内。流水式。试验溶剂交换容量每天最小6次青鳉鱼每天最小次试验容器大小最小10 L2 L，斑马鱼最小5 L。 6.5 试验溶剂体积8 L，青鳉鱼最小1.5 L，斑马鱼最小4 L。 6.6 水温：对于黑头呆鱼和青鳉鱼25±2)℃，对于斑马鱼26±2)℃。 6.7光照周期12-16 h光照，12-8 h黑暗每升小于5 g采用三个暴露浓度以及一个对照，必要时可采用溶剂对照。三个测试浓度间距因子在3.2和10之间。最高测试浓度由最大容许浓度决定，其中可来自于一个搜寻范围其他的毒理数据或10 mg/L，或在水中的最大溶解度，中的最低值。最大容许浓度下鱼群的死亡率应低于10%。 每个测试浓度鱼数目黑头呆鱼4条雌鱼和2条雄鱼青鳉鱼5条雌鱼和5条雄鱼喂养每天喂活的或冷冻的无节幼体海虾商业购买的或以上混合未吃完的食物和粪便应从测试容器中清理出去，每周至少两次。60%空气饱和度预暴露期化学品暴露期生物终点行为第二性特征VTG，性腺组织病理学评价(可选)。 7. 测试过程 7.1 在预暴露处于生育期的雄性和雌性鱼共同暴露于试验容器中。暴露21天，在21天暴露时对鱼进行取样。对于黑头呆鱼和青鳉鱼进行第二性特征测量对于斑马鱼和黑头呆鱼，收集血液样品，测定，对于斑马鱼也收集头/尾代替检测其中的；对于青鳉鱼，收集肝脏检测。 7.3 比较对照组和实验组的第二性特征VTG测量结果，得到受试物的生殖毒性在测试期间，受试物质的浓度应定期测定，具体如下：稀释剂和毒物储备液的流速最好每天检查，至少每周检查两次，在整个测试期间不得超过10％。建议在测试开始时测量所有容器中的受试化学物质的实际浓度，随后每周测试一次。 建议测试结果基于测量浓度。但是，如果溶液中受试物质的浓度在测试期间，稳定保持在名义浓度的± 20%之内，那么测试结果可基于计算值或测量值。