家畜肉孢子虫分子系统学研究.pdf

摘要 本文对耿马和昆明两地区黄牛、水牛、猪体内12个种或型的肉饱子虫猪「人肉饱子虫 (S.suihominis ，米氏肉抱子虫 (S.miescheriana ，人肉饱子虫 (S.hominis ，毛状 肉抱子虫(S.hirsuta ，黄牛枯氏肉抱子虫(S.cruzi，中华样肉抱子虫 (S.sinensis-like) 莱氏肉抱子虫 (S.levinei ，毛状样肉抱子虫 (Shirsuta-like)，人肉样肉饱子虫 (S.hominis-like)，水牛枯氏肉抱子虫 (S.cruzi-like ，中华肉抱子虫(S.sinensis)，梭 状肉抱子虫(￡一fus扣rmis)」的总DNA通过RNAITS1全区片段的扩增、18SrRNA基因的 PCR-RFLP和18SrRNA基因的PCR-测序分析，进行了系统学研究;并对上述肉抱子 虫的感染率进行了调查6、结果如下。 耿马地区的猪体内的猪人肉抱子虫和米氏肉饱子虫自然感染率分别为88%.17%0 黄牛体内的肉抱子虫感染率如下:人肉抱子虫36%、毛状肉抱子虫12%、枯氏肉抱子虫 68%、中华样肉抱子虫8%。水牛体内肉饱子虫感染率分别为:莱氏肉袍子虫14%、毛 状样肉抱子虫14%、人肉样肉抱子虫42%、枯氏样肉抱子虫71%、中华肉抱子虫28%0 其中，在水牛体内发现的人肉样肉抱子虫包囊属首次报道。我们还在耿马黄牛体内发现 一种尚未见报道的新型肉抱子虫包囊Sarcocystissp.，其感染率为12%(3/25)，包囊大小 _500pm，包囊壁表面光滑，在高倍镜下观察 (400x)，未见突起。 采用酚氯仿法从昆明、耿马两地区的猪、水牛、黄牛肌肉分离出的上述12种肉抱子 虫单个包囊抽提出DNA作为模板，PCR扩增它们的全ITS1区域。在用同一对引物做PCR 扩增时，除莱氏肉抱子虫无扩增带外，其他几种肉抱子虫都获得单一条扩增带。扩增带 有如下两个特点:第一:同一个虫种的该区长度的差异没有显著性。第二:其余11个种 或型肉抱子虫的该区有长度多态。按照它们的分子量范围，我们把它们分成两种类型， 一种是分子量大约在690-790bp长度范围内，另一种分子量大约在474-480bp。前者包 括猪人肉抱子虫、毛状样肉抱子虫、毛状肉抱子虫、米氏肉抱子虫、黄牛源枯氏肉抱子 虫、水牛源枯氏肉抱子虫、梭状肉抱子虫。后者包括人肉样肉抱子虫、黄牛源人肉饱子 虫、中华肉袍子虫、中华样肉抱子虫。对于这种长度多态性，我们推测是由于ITS1区域 在一些种有缺失和重复而造成。第三:形态相似的两种不同来源虫种的ITS1区域分子量 大小相近，属于同一种类型。此结果支持从黄牛和水牛两种来源形态相似的肉饱子虫可 能为一个种的观点，即黄牛枯氏肉抱子虫与水牛枯氏肉袍子虫，为枯氏肉抱子虫 (Sarcocystiscruzi)，黄牛毛状肉袍子虫与水牛毛状样肉袍子虫，为毛状肉袍子虫 (Sarcocystishirsuta)r黄牛人肉抱子虫与水牛人肉样肉袍子虫，为人肉抱子虫 (Sarcocystishominis)，中华肉袍子虫与黄牛源中华样肉抱子虫，为中华肉抱子虫 (Sarcocystissinensis)。} 我们对猪人肉抱子虫、人肉抱子虫、人肉样肉抱子虫、中华肉抱子虫、中华样肉 饱子虫、毛状样肉抱子虫、梭状肉抱子虫、黄牛和水牛源枯氏肉抱子虫包囊、毛状肉袍 子虫各2个及Sarcocystissp包囊一个，共21个包囊提出的DNA模板进行了18SrRNA基因 的PCR扩增，并对扩增产物直接测序。除了毛状肉他子虫一个包囊获得了1条1906p长度 的DNA序列外，其余20个包囊获得1500bp左右长度的DNA序列。用这些序列与其他已 报道的虫种的同一段序列的比较分析表明: 1) 18SrRNA基因变异区的缺失和插入在种内相对稳定，而在种hi却有明显的 变异，是区别虫种的重要信息。 2) 序列差异率 (percentdivergence)比较发现:水牛源与黄牛源枯氏肉抱子虫 之间;中华肉抱子虫与中华样肉袍子虫之间;毛状肉抱子虫与毛状样肉饱子虫之间;人 肉抱子虫与人肉样肉抱子虫之间有很高的同源性。存列差异率在水牛源和黄牛源枯氏肉 抱子虫之间为0.2-0.6 :在中华肉抱子虫与中华样肉抱子虫之间为0.9yo:毛状样肉袍 子虫与毛状肉袍子虫之间的序列差异率在0.2-1.0%之间;人肉抱子虫与人肉样肉抱子虫 之间的序列差异率在0.1-0.2%之间。这些序列差异率的均数 (0.8%)与肉抱子虫种内 序列