蜂蜜中烟曲霉素残留量测定 液相色谱串联质谱法.docVIP

9993333 前 言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准是按照GB/T 20001.4-2001《标准编写规则 第4部分：化学分析方法》SN/T0001-1995《出口商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定》起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：刘晓茂、葛娜、李学民、王飞、张进杰、曹彦忠、宋强。 蜂蜜中烟曲霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了蜂蜜中烟曲霉素残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于蜂蜜中烟曲霉素残留量的测定。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 方法提要 蜂蜜试样用水稀释，经HLB固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱（ESI+）检测，外标法定量。 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1 甲醇：色谱纯。 4.2 乙腈：色谱纯。 4.3 甲酸：优级纯。 4.4 乙酸乙酯：色谱纯。 4.5甲醇-水（3+7，V/V）溶液：取30 mL甲醇（4.1）用水定容至100 mL。 4.6乙腈-水（1+1，V/V）溶液：取50 mL乙腈（4.2）用水定容至100 mL。 4.7 标准物质：烟曲霉素(CAS: 23110-15-8)；纯度大于等于98%。 4.8 烟曲霉素标准贮备溶液：1.0 mg/mL。称取适量的烟曲霉素标准物质(4.7)，用甲醇溶解并配制成1.0 mg/mL的标准贮备液。避光保存于－18℃冰柜中。 4.9 烟曲霉素标准工作溶液：1.0 μg/mL。吸取适量烟曲霉素标准贮备溶液（4.8），用乙腈-水（4.6）稀释成1.0 μg/mL的标准工作溶液，避光保存于－18℃冰柜中。 4.10 HLB固相萃取柱：500mg，6ml，或相当者，使用前依次用5 mL甲醇和10 mL水预处理，保持柱体湿润。 4.11微孔滤膜：0.2 μm，尼龙。 5 仪器 5.1 液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2 分析天平：感量分别为0.01 mg和0.01g。 5.3旋涡混匀器。 5.4 固相萃取装置。 5.5 真空泵：真空度应达到80kPa。 5.6 氮气吹干仪。 5.7 三角瓶：200 mL。 5.8 试管：10mL。 6 试样的制备与保存 6.1 试样的制备 对于无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过50℃的水浴中振荡，待样品全部融化后搅拌均匀，冷却至室温。分出0.5 kg作为试样。 6.2 试样保存 试样置于常温下，避光保存。试样在制备和保存过程中避免受到污染待测物含量发生变化。1提取净化 称取蜂蜜样品5 g（精确到0.01g），置于200 mL三角瓶（5.7）中，加入15 mL水，涡旋混合5min后，全部倒入下接固相萃取柱（4.10）的贮液器中，在固相萃取装置（5.4）上使样液以小于2 mL/min的流速依次通过固相萃取柱，待样液全部通过后，用25 mL甲醇-水(4.5)洗涤固相萃取柱，弃去全部流出液。在65kpa的负压下，减压抽干10min。用7 mL乙酸乙酯(4.4)洗脱至10 mL试管（5.8）中，于40水浴中氮气吹至近干用1mL乙腈+水（4.6）溶解残余物7.2.1液相色谱参考条件 a） 色谱柱： C18，1.7μm，50 mm×2.1 mm（内径）或相当者； b） 柱温：35℃; c） 进样量：10 μL。 d） 流动相：Ａ：0.Ｂ：7.2.2质谱参考条件 a) 离子源：电喷雾离子源； b) 扫描方式：正离子扫描； c) 检测方式：多反应监测（MRM）； d) 雾化气气帘气、7.3.3液相色谱-串联质谱测定 7.3.3.1定性确证 被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间与混合基质标准校准溶液中对应组分的保留时间偏差在±2.5%之内；且样品谱图中被测组分的相对离子丰度与浓度接近的混合基质标准校准溶液谱图中对应的相对离子丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定样品中存在对应的待测物。 表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度K K＞50% 20%K50% 10%K20% K≤10% 允许的最大偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 7.3.3.2定量测定 外标法定量：在仪器最佳工作条件下，烟曲霉素的混合基质标准校准溶液进样测定，以混合基质标准校准溶液浓度为横坐标，