血液病患者真菌感染DNA测序检测方法的建立.pdfVIP

2013年11月 临床研究 促进母婴身心健康；提高了护理质量和患者满意度 。 [2]秦钢花.临床护理路径在慢性患者的健康教育中的应用[J].中国民康 参考文献 医学杂 志，2008，1(I)；83. [1]黄海珠，陈丹桂.产科门诊如何做好产前健康教育 [J] .中外医学研究， [3]庞婷，霍小燕. 产前健康教育对分娩的意义.《中国妇幼健康研究》， 2011，9(10) ：61. 2002年第04期. 血液病患者真菌感染 DNA 测序检测方法的建立 宋小彦 蔚利纳 ( 郑州市第一人民医院 450000) 【 】 目的 建立快速鉴定本院血液病患者感染真菌菌种的方法。方法 收集本院2009年1月-2013年1月住院血液病患者血液样本，经BacT/ALERT 摘要 3D血培养仪培养血琼脂培养基及沙保弱培养基分离培养真菌，对其进行总基因组DNA提取，并在真菌ITS保守区设计引物，对血液样本中的真菌DNA测序，建 立真菌感染DNA测序检测方法。结论 初步建立了本院血液真菌感染标本DNA测序检测方法，并可对个性化用药提供指导。 【 】R446 【 】A 【 】2095-1752（2013）32-0207-01 中图分类号 文献标识码 文章编号 感染真菌的血液病患者免疫功能低下，容易发生严重感染，常有多 2 结果 系统功能紊乱，感染后易出现多器官功能衰竭[1]。为了了解血液真菌感 2.1 测序结果 经ITS1，ITS2引物双向测序，测序背景信号低，无 染的种群分布，为临床用药提供指导，我们对本院2009年1月-2013 套峰、杂峰。通过Seqman软件比对，在引物下游20bp后，序列100%一致。 年1月住院血液病人血液样本进行了真菌分布鉴定。 2.2 真菌菌种分布 血液病患者临床标本分离出640株真菌菌种， 1 材料和方法 包括4个菌属的15个菌种。以白色假丝酵母菌、曲霉菌属、热带假丝 1.1 试剂 基因组DNA提取试剂盒（Fungal gDNA kit， 酵母菌、克柔假丝酵母菌及光滑假丝酵母菌等5种菌为主，分布为白色 Biomiga），PCR胶回收试剂盒（DNA Gel/PCR Purification 假丝酵母菌325株占50.8%，曲霉菌属122株占19.1%，热带假丝酵母 Miniprep kit，Biomiga），Taq DNA 聚合酶（2X Taq PCR 菌77株12.0%，克柔假丝酵母菌50株占7.8%，光滑假丝酵母菌39株 MasterMix ，Biomiga），95%酒精（Sigma），甲酰胺，HiDi，BigDye 3.1 占6.1%，其余27株为其它真菌占4.2%。 kit均购自lifetechnologies，引物由Genscript合成，沙保罗琼脂培养基（麦 3 讨论 芽糖40g，蛋白胨10g，琼脂20g，蒸馏水1L） 血液病并发侵袭性真菌感染在世界的致死率不断攀升[4]。放疗和化疗后 1.2 培养及分离 将取1～2ml血液标本接种于沙保罗琼脂培养 [5]