芽孢杆菌MV0658海因氧化酶基因B克隆及表达研究.pdf

生物化学与分子生物学一专业 研究生：余雪莲 指导教师：黄敏教授 摘要：以本实验室保存的一株地衣芽孢杆菌MV0658的染色体DNA为模板， 设计一对引物，通过PCR方法，获得一段与Bacillus utilization 中Hydantoin proteinB基因相同的特异性扩增主带。分离纯化 后，与pUCl9载体通过T4DNA连接酶平端连接，CaCl2转化法转化大肠杆菌 (E 离纯化，限制性酶酶切和测序等一系列鉴定实验，得到六个重组质粒，分别命 utilization 名为pMVl000-p～fi／1005，均含有地衣芽孢杆菌Hydantoinprotein 量为63KD，理论等电点为5．49，其中疏水性氨基酸占35．8％。 中含有PCR扩增片段，且为正向插入。加入IPTG进行诱导表达，得到预期大小 ‘ ’ 的Hyu—Q基因表达蛋白。