环氧化酶-2VEGF在非小细胞肺癌组织中的表达及意义.DOCVIP

临床医学论文-环氧化酶-2VEGF在非小细胞肺癌组织中的表达及意义 【摘要】? 目的:观察环氧化酶-2（COX-2）、VEGF在NSCLC及非肿瘤性病变肺组织中的表达，探讨其在NSCLC发生发展及肿瘤血管生成中的作用。方法:制作71例NSCLC和21例非肿瘤性病变肺组织共92例的组织芯片，采用免疫组化技术检测COX-2、VEGF的表达。结果:①COX-2、VEGF在NSCLC组织中的阳性表达率分别为77.47%、77.06%，均显著高于非肿瘤性病变肺组织（14.29%，38.10%）。COX-2的表达与肺癌组织的病理类型有关;VEGF的表达与肿瘤大小、淋巴结转移与否有关。②NSCLC组织中COX-2与VEGF表达具有相关性。结论:①COX-2和VEGF在NSCLC的发生、发展、转移过程中发挥调控作用，可作为判断NSCLC转移和预后的重要生物学指标。②COX-2可能通过调节VEGF的表达参与NSCLC组织中血管生成。 【关键词】? 非小细胞肺癌;COX-2;血管内皮细胞生长因子;组织芯片 ????? 　　研究发现环氧化酶-2（COX-2）在多种肿瘤组织中高表达，并参与肿瘤血管形成，由COX-2催化合成的前列腺素可能作为血管生成剂促进肿瘤的形成。在人前列腺癌组织中发现COX-2与VEGF表达基本一致，而其增高幅度与肿瘤恶性程度相关 ［1］ 。本研究旨在探讨COX-2与VEGF在人非小细胞肺癌组织中的表达、意义及相关性。??????? 　　1 材料与方法?????? 　　1.1 材料????? 　　1.1.1? 研究对象:收集选择青岛市立医院胸外科2004年1月～2005年10月间手术切除非小细胞肺癌标本73例（术前均未行放、化疗）及肺良性疾病21例作为组织对照，所有标本均经病理检查证实并取自病变的典型区域。其中NSCLC病理组织学诊断及分级采用WHO1999年肺癌组织学分类、分级标准 ［2］ ，分期采用1997年国际抗癌联盟（UICC）制定的肺癌临床分期标准 ［3］ 。所有标本均及时经10%中性福尔马林固定，熔点为56℃～58℃的石蜡包埋。?????? 　　1.1.2? 研究材料:鼠抗人VEGF单克隆抗体购自Santa Cruz公司，鼠抗人COX-2单克隆抗体、PV9000通用型免疫组化检测试剂盒、非免疫小鼠IgG均购自北京中杉公司。每批实验均分别取COX-2、VEGF阳性片作阳性对照，并分别用同种动物非免疫血清代替一抗作阴性对照。?? 　　? 　　1.2 方法????? 　　1.2.1? 组织芯片的制作:①观察每一组织标本的HE切片以确定蜡块穿刺位置;②用Beecher Instru-ments生产的组织芯片仪，从蜡块标记部位逐个取出2mm组织芯，随即推入受体蜡块上已打好的孔内，制作成组织芯片蜡块;③将制作好的组织芯片蜡块面向下置于模具中，60℃烤箱中放置1h，使蜡块重新熔为一体。随后将蜡块连同模具一同取出，静置自然冷却至室温，然后置于-4℃冰箱中7min，将蜡块与模具剥离;④将制作好的组织芯片蜡块3μm～4μm连续切片，冷水漂片，挑选组织芯完整的切片转移至56℃水中展片，用预先制备好的APES载玻片捞片。?????? 　　1.2.2? 组织芯片免疫组化标记:主要步骤为:①组织芯片切片常规脱蜡至水;②内源性过氧化物酶阻断;③组织微波抗原修复;④滴加适当稀释的一抗（其中COX-2:1∶600稀释，VEGF:1∶300稀释），湿盒内冰箱中4℃过夜;⑤分别滴加试剂1、试剂2，均在湿盒内37℃孵育20min;⑥DAB显色，苏木素复染，脱水，透明，封片。?? 　　? 　　1.3 结果判定?????? 　　COX-2、VEGF免疫组化染色结果判断标准采用Kim? ［4］ 阳性细胞半定量积分法:光镜下分析， 在排除非特异性染色的前提下，A以切片中阳性细胞染色强度分级，0级:阴性;1级:弱阳性;2级:中等强度阳性;3级:强阳性。B以切片中阳性细胞比例评分，染色的范围标记为0（0）、1（1%～25%）、2（26%～50%）、3（51%～75%）、4（76%～100%）;两积分相加之和作为最后的染色积分，其积分≥2认为阳性，其余均为阴性。 　　1.4 统计学分析???? 　　应用SPSS软件包11.5进行数据处理，以P0.05确定差异有显著意义。?????? 　　2 结果?????? 　　2.1 组织芯片的质量本研究制成2个组织芯片蜡块，蜡块完整，肉眼可见组织芯排列整齐，外形为圆形或类圆形，无缺损现象。芯片HE染色结果:点阵分布均匀，组织芯完整，只有2例组织芯缺失不全，1例组织芯出现移位，为统计方便取有效例数92例（其中NSCLC组71例、对照组21例），有效率为97.87%，仍可代表原样本信