实时PCR检测HSV2 DNA的方法学评价及应用.DOCVIP

临床医学论文-实时PCR检测HSV2 DNA的方法学评价及应用 【摘要】? 目的 对本室利用Taq Man MG技术建立的HSV2实时定量PCR法进行方法学评价及临床应用。 方法 收集60名近期有流产史妇女的全血及血清标本，分别用FQPCR和ELISA法同时检测，并进行比较；另对FQPCR从重复性、灵敏度、线性范围、特异性几方面进行方法学评价。结果 对60份临床标本检测，ELISA法的阳性率为16.7%，FQPCR法的阳性率为31.7%，明显高于前者（P0.05)。FQPCR法的重复性较好［批内CV(变异系数)值为2.29%，批间CV值为4.76%］、线性范围好(4.75×101～106 copies/μl，r=0.998)、灵敏度达到47.5copies/μl、特异性较好（对HSV1、Vero细胞、巨细胞病毒、弓形虫等无特异性扩增）。结论 实时PCR测定HSV2方法比传统的ELISA法更快速灵敏，是较有发展前途的新技术。 【关键词】? 实时定量PCR； 单纯疱疹病毒2型； 生殖器疱疹 ??? 【Abstract】? Objective? To evaluate newly established realtime PCR method with Taq Man MG technique and apply it into clinical research Methods?? Specimens from 60 women with recent abortion history were collected and detecteol with FQPCR and ELISA methods. FQPCR were evaluated on reproducibility,specificity,linear range and sensitivity. Results? The position rate of FQPCR and ELISA is 31.7% and 16.7% respectively, the former is higher than the latter(P0.05). The assay showed good reproducibility (intraassay coefficients 2.29％ and interassay coefficients 4.76％)， good linear range (4.75×1014.75×106 copies／μl，r=0.998) ，good specificity(distinguishing HSV2 from other pathogenic microorganism) and sensitivity of 47.5 copies／μ1. Conclusion? FQPCR for detecting HSV2 is more sensitive, faster than ELISA and is a promising technique. ??? 【Key words】? rea1time PCR； HSV2； genital herpes ??? 单纯疱疹病毒2型（herpes simplex virus,HSV2）是引起生殖器疱疹（genital herpes,GH）的主要病原体，GH具有长期潜伏性、无法彻底治愈、病情反复发作等特点。孕妇GH还可引起胎儿宫内感染或新生儿感染，导致流产、早产、先天畸形、新生儿死亡或发生严重后遗症［1］。近年来，GH的发病率不断上升，其中部分表现不典型，甚至无症状，而及时准确地对这类感染者诊断并采取相应的防治措施可有效降低感染率［2］。 ??? 感度不高、耗时较长等缺点。而实时荧光PCR（realtime PCR）是近几年发展较为迅速的新技术，具有高敏感性、高特异性和高精确性等优点。本实验室在前期利用Taq Man MGB技术，建立一种检测HSV2的实时定量PCR，现对该方法进行临床应用及方法学评价，结果报告如下。 ??? 1? 材料和方法 ??? 1.1? 主要仪器及试剂 ??? ELISA定量酶标仪Model550 BIORAD(美国)；实时定量PCR仪RG3000(澳大利亚)；实时PCR法定量标准品实验室自制；HSV2 IgM ELISA KIT晶美生物；引物及探针上海基康公司设计并合成；HSV2　SAV株购自中国疾病预防控制中心病毒研究所。 ??? 1.2? 标本 ??? 从2004年1月至2004年6月，以广东省各大医院就诊的近期有流产史60名妇女作为研究对象，收集全血及血清两类标本，并置于-20℃保存备用。 ??? 1.3? 方法