实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑CalpainⅠ表达及其临床意义.DOCVIP

临床医学论文-实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑CalpainⅠ表达及其临床意义 【摘要】? 目的 通过观察动物模型脑的钙蛋白酶(Calpain)Ⅰ表达的变化，探讨急性播散性脑脊髓炎的发病机制。方法 ①利用雌性Wistar大鼠建立自身免疫性脑脊髓炎（EAE）动物模型；②通过免疫组化染色动态观察EAE大鼠不同时段各组鼠脑内CalpainⅠ的分布及表达的变化情况。结果 CalpainⅠ在发病后7 d达高峰，且染色反应增强，与正常对照组相比有统计学意义（P0.05）。结论 EAE模型建立方法稳定、可靠，成功率高。CalpainⅠ在正常大鼠的中枢神经系统中广泛存在。EAE发病过程中，CalpainⅠ在鼠脑表达增高。 【关键词】? 实验性自身免疫性脑脊髓炎；钙蛋白酶；中枢神经系统 ??? 【Abstract】? Objective? To investigate the expression of CalpainⅠin different periods during experimental auto-immune encephalomyelitis(EAE) in Wistar rats brain.Method? 1.To establish EAE model using female Wistar rats;2.Using immunohistochemical staining method,dynamically observe the distribution and changes of expression in different periods in EAE rats brain.Results? Calpain Ⅰ reached peak at 7 days after onset,and staining was increased,which was statistically significant compared with the normal control group (P0.05).Conclusion? The method of establishing EAE model is stable,reliable,and with high success rate.CalpainⅠexists widely in the CNS of normal rats.The expression of CalpainⅠis increased during the pathogenesis of EAE in the rat brain. ??? 【Keyword】? Experimental auto-immune encephalomyelitis(EAE);Calpain;Central nervous system（CNS） ??? 急性播散性脑脊髓炎（acute disseminated encephalomyeliti，ADEM）是以中枢神经系统（centralnevous system，CNS）白质的急性炎症性脱髓鞘病变为特点的自身免疫性疾病，确切病因及发病机制迄今不明［1］。实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）与人的ADEM临床、生化、免疫及病理等诸方面具有相同或相似的特征，目前已被国内外公认是研究ADEM的理想的动物模型［2］。 ??? 2006-06～2008-02本科应用急性EAE模型动态观察EAE发病过程中不同时期的CalpainⅠ表达的变化，旨在探讨EAE发病的病理生理，为临床治疗ADEM提供理论基础，为Calpain抑制剂的应用时机、治疗持续时间等提供理论依据。 　　1? 材料与方法 　　1.1? 一般资料 　　1.1? 材料 　　1.1.1? 实验动物? 　　健康Wistar雌性大鼠100只，6～8周龄，体重150～200 g；雌性豚鼠10只，体重300～400 g，由中国医科大学实验动物中心提供。 　　1.1.2? 主要试剂及药品? 　　①完全福氏佐剂（CFA）：购自Sigma公司；百日咳疫苗原液（BPV）：购自北京生物制品研究所。②兔抗大鼠CalpainⅠ多克隆抗体，购于Abcam公司；Sp试剂盒和DAB显色盒均购于福建迈新公司。③多聚赖氨酸溶液：Sigma公司进口分装。用时蒸馏水1∶10稀释。 　　1.2? 方法?　　1.2.1? 完全抗原制备(EAE模型的抗原制备)? 　　取10只豚鼠称重后，按脑脊髓重量1 g加生理盐水1 mL的比例，冰浴中匀浆，再将匀浆液与等体积的完全福氏佐剂（CFA）充分混合，以无菌注射器及反复抽打制成油包水乳剂，作为抗原，4 ℃保存，12 h内用完。 　　1.2.2? EAE模型制备? 　　取20只Wistar大鼠分别称重、标号，正常饲