屋尘螨变应原Der p 1基因的克隆和原核表达.pdfVIP

维普资讯 中国媒介生物学及控制杂志2007 12月 鲞笙 塑 』 !!旦 !笪! 竺 !! ． ! ： · 477 · 文章编号 ：1003—4692(2007)06—047706 【论 著 】 屋尘螨变应原 DerP1基因的克隆和原核表达 刘 良 ，周鹰 ，崔玉宝 ，牛莉娜 ，彭江龙 【摘要】 目的 克隆和分析屋尘螨主要变应原DerP1，并实现原核表达。方法 分离屋尘螨总 RNA，根据 GenBank已公布 的DerP1核酸序列设计引物 ，用RT—PCR扩~~DerP1编码基因，克隆~pMD19一T载体、亚克隆至表达载体 pET一28a(+)，将表达质粒转化至E．coliBL21(DE3)并用 IPTG诱导表达 ，并对表达产物进行免疫印迹鉴定 。结果 成 功构建了表达质粒 pET一28a(+)一Derf1，Westernblotting显示原核表达获得成功 。序列分析表 明所获得的DerP1编码 基因与参考序列 同源性达99．9％，推测其编码氨基酸222个。屋尘螨和粉尘螨 1类变应原氨基酸序列相似率为 60％，而 粉尘螨与梅 氏嗜霉螨 1类变应原相似率为 85％，分子进化分析亦提示粉尘螨和梅 氏嗜霉螨亲缘关系较近 。推测所获 rDerP1二级结构 中，a螺旋 占33．78％，延伸链 占21．62％，随机线圈 占44．59％。结论 尘螨变应原DerP1原核表达获得 成功，为进一步生产重组变应原奠定了基础 。序列分析表 明粉尘螨和梅 氏嗜霉螨 的亲缘关系可能更近 ，而与屋尘螨关系 稍远 ，此与现行的形态学分类系统并不符合 。 【关键词】 尘螨 ；DerP1；克隆；原核表达；生物信息学 中图分类号 ：R384．4 文献标识码 ：A Cloningandexpressionofgroup1allergenofDermatophagoidespteronyssinus L儿，Liang ，ZHOU Ying，CUIYu—bao， NJULi—na，PENGJiang-long． YanchenCollegeofMedicalOccupationandTechnology，Yancheng224005，China Correspondingauthor：C y“一bao，E-mai1：6801609@ 163．corn 【Abstract】 Objective Toclone，expressandcharacterizeDermatophagoidespteronyssinusallergens．Methods Based onnucleotidesequencecodingforDerP 1intheGenBank，wedesignedprimersandamplifiedthecDNA fragmentcodingfor thegroup 1allergenfrom adultD ．pteronyssinusbyRT—PCR．Afterpurificationandrecovery．thecDNA fragmentwascloned intothepMD19一Tvector．Thefragmentwasthensequenced，subclonedintotheplasmidpET28a(+)，expressedinE．coli BL21and identified by W estern blotting．Results ThecDNA codingforgroup 1allergen ofadultD pteronyssinuswas cloned，sequencedandexpressedsuccessfully．SequenceanalysisshowedthegenehomologywithDerP 1reportedinGenBank was99．9％ ．the1atterenc