异丙酚对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用机制研究.pdf

中文摘要 前 言 脑缺血再灌注损伤是由多种因素共同作用而引起的一系列复杂的病理 生理变化过程，其病理生理机制是一种损伤性级联反应，可引起一系列神经 化学，蛋白质与核酸代谢的改变。近年来，随着神经科学和分子生物学技术 的不断发展，已深入到亚细胞和分子水平来进一步揭示脑缺血再灌注损伤 的发病机制。 围术期脑缺血再灌注损伤一直是临床麻醉与复苏所关注的问题。对脑 缺血再灌注损伤的机制以及麻醉药对其影响的研究仍是目前研究的热点课 题之一，对其进行深入细致的研究有助于开发新的药物及脑保护方法，为对 围术期脑缺血缺氧性损伤的保护开辟新的途径。许多研究表明异丙酚对中 枢神经系统具有与巴比妥类药物相似的作用，可引起脑血管收缩、脑血流量 减少、颅内压和脑氧代谢率降低。但近年来研究发现各种麻醉药所产生的 脑保护程度并不与它们所引起的脑代谢降低幅度成比例。目前，虽然多数 研究认为异丙酚对脑缺血缺氧性损伤具有一定保护作用，但对其保护作用 的机制迄今尚未完全阐明。因此有必要对其神经保护作用的机制进行更加 深入的研究与探讨。 本课题是结合国内外最新研究成果，在前人的基础上对异丙酚脑保护 作用的机制进行更加深入细致的研究与探索。在大鼠全脑缺血再灌注损伤 模型上，利用先进的观测指标及检测手段，进一步探讨异丙酚对大鼠脑缺血 再灌注损伤保护作用的机制，为其在实验及临床上的合理应用提供理论基 础。本研究分为四部分：一、异丙酚对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马线粒体 能量代谢、A11P酶活性及自由基系统的影响；二、异丙酚对大鼠脑缺血再灌 注损伤后海马组织氨基酸递质水平变化及神经元凋亡的影响；三、异丙酚对 大鼠脑缺血再灌注损伤后海马组织c—fos和HSP70基因表达的影响；四、 达的影响。 实验材料与方法 一、实验方法 1．动物模型的建立采用Pulsinelli等介绍的方法并作一定改进，建立大 鼠全脑缺血再灌注损伤模型。动物腹腔注射戊巴比妥钠(40ms·kg。1)麻 醉后，颈后正中切开分离肌肉，暴露第一颈椎翼孔，用直径0．5mm的大头针 烧灼双侧翼孔内椎动脉，造成永久性关闭。然后翻转大鼠作颈部正中切开， 分离出双侧颈总动脉，用4—0丝线环套颈总动脉，由耳后皮肤引出固定，缝 合颈部伤口，放回保温鼠笼。手术后24h，腹腔注射生理盐水或异丙酚。固 定动物，10min后，收紧双丝线阻断颈总动脉血流，造成大鼠全脑缺血。缺 血10min后，松开丝线恢复脑血流再灌注。实验过程用热敏温度计探头连 续测定肛温，采用电灯泡和电热毯加热的方法，保持大鼠直肠温度在37℃ ±0．5。C。 2．实验动物分组全体动物术前禁食12h，自由饮水。将180只雄性 Wistar大鼠随机分为5组： A组：假手术对照组，仅分离椎动脉和颈总动脉，不行阻闭，术后24h腹 鼠。 B组：缺血再灌注对照组，全脑缺血10min，在缺血前10rain腹腔注射 NS 5ml，分别在再灌注60rain、24h、72h三个时点处死大鼠。 c组为缺血再灌注异丙酚预处理组，按异丙酚用量又分为三个亚组，余 同B组： 注射，分别在再灌注60min、24h、72h三个时点处死大鼠。 腔注射，分别在再灌注60rain、24h、72h三个时点处死大鼠。 腔注射，分别在再灌注60rain、24h和72h三个时点处死大鼠。 3．观察指标及方法 (1)异丙酚对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马线粒体能量代谢、ATP酶 活性及自由基系统的影响：全脑缺血10rain再灌注60min时，各组断头处死 大鼠8只，分离出海马组织液氮冷冻。 ①HPLC法测定海马组织线粒体ATP、ADP、AMP的含量； ．2． 的活性和MDA的含量； ③透射电镜观察海马线粒体超微结构的改变。 (2)异丙酚对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马组织氨基酸递质水平变化 及神经元凋亡的影响：在再灌注60min和72h时，各组分别处死大鼠6只， 分离海马组织液氮冷冻，取脑中间块10％中性甲醛固定。． 酸(GABA)和甘氨酸(Gly)水平的变化； ②流式细胞仪(FCM)检测海马组织神经细胞的凋亡指数(AI)； ③HE染色光镜检测海马CAl区凋亡神经元的密度。 表达的影响：于再灌注60rain时，各组断