鹅垂体特异性转录因子PIT1基因启动子的克隆及调控区的初步鉴定.pdfVIP

11 1511 1011111t1111／11z／1／1／／9IBI ＼IIYIilllll21111t110111 鹅垂体特异性转录因子(户限J)基因启动子的克隆 及调控区的初步鉴定 研究生：赵荣雪 导师： 陈国宏 教授 (扬州大学动物科学与技术学院 摘要 垂体特异性转录因子1(P皿J)是重要的组织特异性转录因子，也是调控垂体 表达调控起重要的作用，认为是与生长相关和作为研究动物生长机制的重要候选 基因之一。但目前在畜禽上，该基因研究还不够深入，尤其是对该基因的转录调 控水平的研究，本研究以鹅为实验对象，成功地克隆了尸肛J基因启动子区序列， 并对该区域从转录调控方面进行初步研究。 1．鹅PIT-I基因启动子区域克隆及序列分析 本实验利用基因组步移技术，首次从鹅基因组中克隆到了共约3．0kb的PIT-1 基因5’启动子区序列，序列已提交到Genbank(序列号：EU924269)。 利用在线软件对所得结果进行了序列分析和物种间纠工J基因5’启动子区序 列比对和系统进化树构建。结果表明所克隆的片段中含有两段启动子，分别命名 为近端和远端启动子，且都含有典型的TATA框和CAAT框，还预测到一些转录 上游．200bp区域保守性比较强，很可能为核心启动子序列，且鹅与鸡的同源性最 不同物种间进化关系。 2．启动子区功能的鉴定和转录调控的研究 利用基因组步移获得了鹅川一J『基因的启动子区序列，采用了系列缺失法成 功构建了一系列启动子缺失突变体(一2995／-1 bp，一1485／一1bp，一1293／-1bp，-1014／-l bp，．775／．1bp，．561／．1bp，一353／．1bp，-206／-1bp)，使用构建荧光素酶报告基因 载体和瞬时转染分析法进行启动子区活性的检测和转录调控的初步研究，与阴性 对照对比发现不同区段均具有启动子活性，系列启动子缺失突变体的启动活性之 间还存在不同，．561／．1 bp片段得活性最强，可以初步推断此段可以作为该基因的 核心启动子区，也可以认为该区域(．353／-1 bp一561／-1bp)含有调控基因表达的顺 式作用元件，如TFIID，HOXDl0， 一步研究其转录调控机制奠定基础。 关键词：尸，正．f基因；基因组步移；鹅；启动子；转录调控 inthePromotorof PIT-land Cloning goose gene ●● ● ● 1 ·●J- - ● lnentilicate preliminaryregulatoryregion M．S．Candidate：Zhao Rong—xue Chen Supervisor：Prof．Guohong Abstract factor actsasa factorof