白花前胡及PdIa对缺血再灌注大鼠心肌凋亡相关蛋白表达及血清IL6水平的影响.pdfVIP

中 文 摘 要 前 言 厂缺血再灌注可引起心肌细胞再灌注性损伤(ischernicreperfu- sioninjury,IRI)，而IRI的病理形成与中性粒细胞的参与有密切关 系，且白细胞介素6(interleukin一6,IL一6)在中性粒细胞介导的 IRI中起着十分重要的调节和修饰作用。IRI分为可逆性损伤和 不可逆性损伤，后者最为严重，能引起受累心肌细胞死亡。近年来 的研究显示，IRI中受损心肌除发生坏死外，尚有部分细胞呈现凋 亡(apoptosis)。已证明在缺血再灌注中，心肌细胞凋亡与凋亡刺 激蛋白Fas,凋亡促进蛋白bax及凋亡抑制蛋白bcl-2的表达密 切相关，如能调控这些相关蛋白的表达，可能成为防治IRI的又一 新靶点。 中药白花前胡(PeucedanumpraeruptorumDunn)及其有效成 分Pd一la有抗急性心肌IRI作用，Pd一la还有抑制Ca2+内流、促 进K通‘道开放、抗氧自由基及抗血小板聚集等心血管活性，故推 测白花前胡及Pd一la通过影响细胞因子及凋亡相关蛋白的表达 对缺血再灌注心肌产生有益影响，然而，迄今尚无类似报道拿本研 究采用免疫组化技术联合计算机图像分析和放射免疫分析等方 法，分别对大鼠急性缺血再灌注心肌凋亡相关蛋白Fas,bcl一2, bax表达及血清中IL-6水平进行了分析，重点评价了中药白花前 胡及Pd-la的作用。盔于IRI与中性粒细胞等炎性细胞浸润有 着密切关系，我们还通过HE染色法进行了形态学比较，以便进一 步探讨并比较两药的抗III机制，为寻找高效、优质和安全的防治 缺血性心脏病的新药提供理论依据:沂 / 实验方法 又.药品与试剂: ·1· 前胡颗粒(BQ，国家药品监督管理局新药临床研究批号: 2000ZL078)，及白花前胡甲素(Pd一Ia):均由本室从中药白花前 胡干燥根中提取分离; 硝苯地平:北京双桥制药厂生产，批 1251一白细胞介素6放免试剂盒:北京301放免研究中心标 记; 兔抗大鼠Fas,bcl-2及bax蛋白抗体:SantaCruz生物工程公 司生产; 即用型SABC免疫组化试剂盒:武汉博士德生物工程有限公 司生产; 其它药品及试剂均为国产分析纯。 2.实验方案: 将雄性Wistar大鼠按体重均衡性原则随机分为伪手术组、手 术组、Pd一la溶剂对照组、BQ干预组(低、中、高三个剂量)及Pd 一Ia干预组(低、中、高三个剂量)等10组。麻醉开胸行30min左 冠状动脉前降支结扎伴120min再灌注，建立急性心肌缺血再灌注 模型，利用多导生理记录仪监测血压、心率。当再灌注120min时 行右心室穿刺取血，分离上清用放射免疫法测定几一6浓度。取 左心室缺血心肌组织，制备冰冻切片，分别用SABC法联合计算机 图像分析系统评价Fas,bcl一2,bax表达;比较HE染色心肌组织 中性粒细胞等炎性细胞的浸润情况。全部数据用平均值士标准差 表示，采用StatisticalAnalysisSystem(SAS)进行单因素方差分析、 Studentt检验及简单线性相关分析，p0.05认为有统计学意义。 实验 结 果 1.对缺血再灌注大鼠血压和心率的影响 BQ及Pd一la.能降低平均动脉压，其作用类似硝苯地平，给药 后血压最大变化率分别由对照组的(一11.4土8.3)%和(-2.5土 ·2 · 5.9)%降至(一36.3士6.8)%和(一25.4土5.7)%,p0.01，但对 心率无明显影响。 2.对缺血再灌注大鼠血清中IL一6水平的影响 BQ及Pd一la均能明显降低血清IL-6的水平，其中BQ高剂 量组可使IL一6浓度由对照组的(151.53士17.70)p扩rnl降至 (107.9018.11)pg/ml(p0.01);Pd一Ia组则由对照组的 (152.88土15.25)p扩ml下降至(116.13士10.45)pg/cnl(p 0.05)，其作用强度