膜联蛋白A1在小鼠睾丸中表达、定位及其与受精关系.pdf

中文摘要 膜联蛋囱A1在小鼠睾丸中的表达、定位及其与受精的关系 摘 要 膜联蛋白是一类钙依赖性磷脂结合蛋白，形成进化上保守的多基因家 族，在动、植物中广泛表达。在细胞各种生理功能中起重要作用。膜联蛋 气 一 L 白Al(AmexinAl简称AnxAl)是哺乳动物膜联蛋白家族中的一个重要成 、^ 员，它与细胞增殖、分化、信号传递、炎症等密切相关，前期研究已发现 它在精子中亦有表达，并呈区域性分布，推测与精子的一系列钙依赖事件 如运动、顶体反应过程中的膜融合、受精过程中的精卵相互作用等有关。 但目前它在生殖系统中的作用尚不明确，在睾丸中的表达定位尚未见报 道，对其在精子中的定位研究还相当有限，且还未见关于它在精子中功能 的较为直接的研究。本文以小鼠为实验对象，研究AnxAl在出生后不同 发育时期睾丸中的表达与定位，以期了解它与睾丸出生后发育及精子发生 的关系；同时，对处于不同成熟阶段及不同生理功能状态的精子进行 的关系。本研究旨在为阐明AnxAl在生殖系统中的作用奠定一定的基础， 可望为哺乳动物及人类受精机制的研究提供一定的理论依据，从而为辅助 生殖技术、不育症诊疗与计划生育提供一定的理论指导。本实验分三部分。 1膜联蛋白A1在小鼠睾丸不同发育阶段的表达与定位 对l～8周龄小鼠睾丸进行AnxAl间接免疫组化染色及半定量 生精细胞中均有表达。其中精原细胞染色最强，主要分布在细胞核内；初 级精母细胞多为弱阳性或阴性；圆形精子细胞AnxAl分布在细胞一侧顶 体泡、顶体帽中，精子的AnxAl分布在项体中。精子形成后留下的残余 体亦呈强阳性染色。支持细胞未见明显阳性染色。对l、2、3、4、5、6、 8周龄小鼠睾丸AnXAl免疫组化染色阳性强度即平均积分光密度进行图 中文摘要 小鼠睾丸中表达较低，2周龄后表达升高并达到峰值，而后逐渐下降，至 6～8周趋于平稳。对AnxAl 组的AnxAlmRNA水平与其余各组均存在显著性差异(PO．01)，3周龄与 ， 对 ● mRNA在小鼠睾丸的表达水平出现加龄变化，其变化趋势相似。提示 AnxAl与小鼠生精细胞的增殖分化以及睾丸出生后发育成熟有关。 2膜联蛋白A1在小鼠精子中的定位 用间接免疫荧光染色对取自小鼠生精管道中不同部位的精子以及处 于不同生理状态的精子进行AnxAl定位，以期了解An燃1与精子睾丸后 成熟、获能、顶体反应的关系。发现取自睾丸、附睾头、体、尾部的精子 AnxAl均分布于顶体帽区及尾部，不同部位的精子AnxAl分布无明显差 别。对诱导获能、顶体反应的精子进行AnxAl免疫荧光定位发现根据头 部荧光分布特点分为2种类型：项体帽区标记型(Acrosomal cap)，简称 area， ‘‘Cap’’型；赤道段一项体后区标记型(Equatorialsegment—postacrosomal 型为2．7±1．04％；诱导项体反应组的精子“Cap”型百分率为41．8±4．09％， “Ep”型为58．2±4．09％。同时用考马斯亮蓝染色鉴定精子顶体反应率，发 现获能培养组项体完整的精子百分率为94．6±2．5