小麦叶绿体抗氧化酶基因克隆与遗传转化研究.pdf

崔家骏:小麦叶绿体抗氧化酶基因的克隆与遗传转化的研究 Tris trishydryxymethyIaminoul川]ano 三羚甲基氨基甲烷 x一gal 5-Browo-4-chlor。一:3-indolyl一a一D 5-澳-4一氯一3一}iIR-13 -galactosidc 一D-半乳糖营 砂 ms murashigeandsk11gwe(]川w MS培养基 413:1 ahscisicacrid 脱落酸 6 13.1 6 lwnacladoni1、 6hihllIkIIrII1 Ca.11UoS35Spromoterofcalitlowel 花术l[;菜花叶病u35S mosotc vin ts 启动子 (DNA complementaryDNA 互补DVIA (r6. corheuicilin 投节青霉素 2,4一D 2,4一(lichlorophenlxyacetiacid 2，4一二氯苯氧乙酸 GIIS 3(一glucuroni(lase p一葡糖甘酸酶 HPH hygromycinphosphotransferase 氯霉素磷酸转移酶 IAA indole-3-aceticacid 3-PJJP},乙酸 2一ip 2-isopenty 异戊烯基腺嘿吟 Kan kanamvcio 卡那霉素 寸 AS a(etosyrlngone 己酸丁香酮 NOS Nopalinesynthase 月因月旨碱合成酶 KT kinetin 激动素 Ix-NA八 a-napthaleneaceticacid 。一奈乙酸 neomycinphospllotrandferasell 新霉素磷酸转移酶11 NSTPTR，‘ 链霉素 streptomycin X-Gluc 5-bromo-4-cllloro-3-indolyl 5-澳-9一氯-3- 一3(-D-glucuronide P5IAm-/i-D-葡糖甘酸 了 2 山东农枚大学硕士学价论文 摘 要 为了获得同时过量表达SOD和APX的双价转基因烟草植株，本文以抗旱胜强 的小麦品种旱丰9703为材料，克隆了小麦叶绿体Cu/Zn-SOD和APX基因并对烟 草进行了相应的转化工作，研究结果如下: 1.根据Genebank上登记的小麦叶绿体SOD基因序列设计了一对引物 以小 麦叶片为材料提取RNA用RT-PCR法进行目的基因的扩增 得到了一个约800bp 的片段。经测序分析并且与己知序列比较，二者同源性高达99.6%，但该基因3 端非编码区比己知基因短80by 2 把获得的SOD基因与含35S启动子的pBIH载体重组，构建了正、反义表 达载体，并利用农杆菌介导法转化烟草。PCR和Southern杂交证明目的基因已经 整合到烟草基因组中。 3.根据类囊体膜结合型APX的氨基酸保守序列设计兼并引物，以小麦叶