栉孔扇贝（Chlamys farreri）血细胞及其免疫特性研究.pdfVIP

栉孔扇贝血细胞及其免疫特性的研究 捅 姜 用四种方法对栉孑L扇贝的血细胞进行了分类，将其分成两类：透明细胞 和颗粒细胞。以吉姆萨染色法光镜观察，两种细胞都被染成紫红色，透明细 胞无颗粒，细胞核圆形，居中，细胞质较少，核质比大。颗粒细胞比透明细 胞大且多，染色深，但核质比小，在细胞质中有颗粒，有些颗粒细胞具双核。 电镜观察，透明细胞几乎不含细胞器，常染色质丰富。颗粒细胞有少量的细 胞器，细胞质电子密度高，颗粒有膜包围，细胞有伪足。双核颗粒细胞的两 个核在形态上相同。密度梯度离心，透明细胞主要位于上层，颗粒细胞则大 部分位于下层。流式细胞仪根据血细胞的大小和颗粒，经『F、侧光散射参量 分析，也将血细胞分为透明细胞和颗粒细胞。 免疫细胞化学方法定位过氧化物酶(POD)、酚氧化酶(PO)、碱性磷酸 酶(ALP)。以DAB为底物发色，两类血细胞的细胞质中都显示POD活性， POD阳性率为49．3％，其中透明细胞占18．6％，颗粒细胞占30．7％：不同类 两类血细胞都能观察到PO阳性，瑞氏染色复染结果，PO阳性率为37．5％， 其中透明细胞占13．4％，颗粒细胞占24．1％：两类血细胞的PO阳性率不同， 透明细胞的PO阳性率为32％，颗粒细胞的PO阳性率为40％。以NBT和 BCIP为底物发色，血细胞ALP阳性率为40．1％，其中透明细胞占16．3％， 颗粒细胞占23．8％；两类血细胞的ALP阳性率不同，透明细胞的ALP阳性 率为50％，颗粒细胞的ALP阳性率为61％。 生物化学方法测定POD、PO、ALP酶活性。参照辣根过氧化物酶活性 的标准曲线计算，透明细胞POD活性为2．4 ng／ml，颗粒细胞POD活性为 3．9ng／ml；以多巴胺为底物测得两类血细胞PO活性分别为：透明细胞9个 u／1， 单位，颗粒细胞14个单位：以pNPP为底物，透明细胞的ALP活性为3．0 颗粒细胞的为20．9 u／l。免疫细胞化学方法和生化活性测定两种方法结果表明 颗粒细胞中这三种酶的活性均强于透明细胞。 NBT法测吞噬力，经瑞氏染色后，血细胞NBT阳性率53．7％，其中透明 细胞为18．2％，颗粒细胞为35．5％；两类血细胞抗菌活力的测定结果表明： 中国海洋人学博士学位论艾 透明细胞的Ua为0．196，颗粒细胞的为0．385；两类血细胞溶菌活力的测定 结果表明：透明细胞的uL为0．122，颗粒细胞的为0．262；两类血细胞分别 与不同浓度梯度的菌悬液混合，颗粒细胞活性氧的产生大于透明细胞。而且， 活性氧的产生都随细菌浓度的增加而增加，当细菌浓度达到108cell／ml时， 两类血细胞活性氧的产生都高于其它稀释梯度。按溶菌酶标准曲线对照，颗 粒细胞的溶菌酶活力为2．78 mg／L。颗粒细胞吞噬 mg／L，透明细胞的为O．80 力、抗菌活力、溶菌活力及活性氧产生均强于透明细胞。 以栉孔扇贝血细胞作为抗原免疫Balb＼c小鼠，取出脾脏，聚乙二醇为融 合剂，将免疫小鼠的脾细胞和P3·X63一A98U1小鼠骨髓瘤细胞融合，用同本 进口完全细胞培养基GIT培养杂交瘤细胞。应用免疫荧光抗体技术(IFAT) 检测杂交瘤上清液，检测得到大量阳性杂交瘤细胞，选取其中20株具有较高 分泌能力的杂交瘤细胞冻存备用。 度离心分成的透明细胞和颗粒细胞血细胞分别与4株单抗进行荧光抗体实 验，发现：这4株单抗与透明细胞和颗粒细胞都有不同程度的阳性反应；免 疫酶标抗体(AP)检测与扇贝血细胞的反应，单抗1E7与颗粒细胞质的反应 阳性，单抗2H5与颗粒细胞的细胞质反应阳性，单抗2C6与透明细胞和颗 粒细胞的细胞质反应阳性，单抗1F12与透明细胞和颗粒细胞的细胞质和细 胞膜反应阳性。 流式细胞仪分析结果，四株单抗与两类血细胞都有不同程度的反应。四 株单抗与虹细胞反应的阳性率分别为： 单抗1E7 54．23％，其中颗粒细胞为 39．3％，透明细胞14．93