SGT及其相关蛋白功能研究.pdfVIP

SGT及其相关蛋白功能的研究 摘要 SGT(small TPR)克隆于1998年，由 glutarnine—rich tetratricopeptiderepeat 313个氨基酸组成，其c末端有一段富含谷氨酰氨的序列，中间含有三个串联重 复的TPR结构域。近年来的研究表明，SGT能够与热休克蛋白家族的Hsp70和 拈抗热休克、血清饥饿、化疗药物等引起的细胞凋亡，不仅如此，CHIP、TPR2、 Strap这些含有TPR结构域的蛋白均以不同的方式参与了细胞凋亡的过程。为了 弄清SGT是否也参与了细胞凋亡的过程，我们首先建立了SGT超表达的 诱导的7721细胞凋亡，进～步的研究表明这种促凋亡作用是Caspase依赖的， 光试验表明超表达SGT可使部分P53定位到线粒体。为了进一步探讨SGT的功 能我们应用酵母双杂交的方法以SGT为诱饵筛选人胎肝cDNA文库鉴定出PIAS down、免疫共沉淀，以及激光共 为它的一个新的结合蛋白，接下来用GST-pull 聚焦的方法证实了二者在体内和体外均可相互作用。 D 1,4半乳糖基转移酶(GaITI)是一个最早克隆的糖基转移酶，长期以来 被认为是一个管家基因，本实验室以前的工作表明GalTI是SGT的一个相互作 用蛋白，Ets转录因子家族的成员EIAF可调控其基因的转录。本文研究了Ets 家族的另一成员Ets一1可否调控其转录。我们采用荧光素酶报告基因的方法证实 Ets一1可激活GaITI报告基因的表达，并具有量效关系。我们又采用突变分析法 确定GaT l启动子．215至．139核苷酸区域存在一个Ets．1的结合位点，进一步采 用染色质免疫沉淀试验以及电泳凝胶迁移率改变试验证实Ets一1能够与此区域 DNA直接结合，从而确定Ets一1是调控p1，4半乳糖基转移酶基因的～个转录因子。 半乳糖基转移酶1／Ets／Etsl／E1AF ofthefunctionsof anditsinteraction Studies SGT proteins Abstract Glutamine—rich clonedin1998．It TPR)was SGT(Small Teratricopeptiderepeat of313aminoacidswitha inits terminal consists glutamine—richsequencecarboxyl andthreetandomTPR inthecenterofthe chain．It’S that repeats polypeptidereported SGTinteractswith andHsc70and their activities，which Hsp70 regulateschaperon heat andthe induced againstshock，serum apoptosisbydrugs antagonize depletion usedinchemical TPR such therapies．Furthermore．manydomain—containigproteins as