植物核糖体失活蛋白对家蚕的毒杀作用及其机理的研究.pdfVIP

中文摘要 体失活蛋白(ribosome—irlactivatingprotein，RIP)。本试验利用酸 4B亲和柱纯化辛纳毒蛋白，首先从500克香樟鲜种子 化的Sepharose 中纯化到620mg的辛纳毒蛋白。此法制各的亲和纯的辛纳毒蛋白具有 RNA N-糖苷酶活性。同法从500克蓖麻鲜种子中纯化出850mg具有RNA N一糖苷酶活性的蓖麻毒蛋白。以家蚕三、四、五龄起蚕经口添食试验 表明，两种毒蛋白对家蚕的毒性有很大差异。三龄添食蓖麻毒蛋白的 半致死浓度(Lc；。)是496．4 ppm，而辛纳毒蛋白的半致死浓度(LC。。)高达 16596．4 ppm。不同发育阶段的家蚕幼虫对毒蛋白的敏感性也不同，五 龄时50000 ppm的辛纳毒蛋白与蓖麻毒蛋白已不能致死家蚕。家蚕肠 液对二者的体外消化试验显示肠液对辛纳毒蛋白和蓖麻毒蛋白的降解 程度相近，可以认为二者的毒性差异并不是由于家蚕消化道内的消化 酶对二者的不同降解而引起的。提取家蚕80S的核糖体后，用植物核 糖体失活蛋白对其体外作用后，抽提出rRNAs经酸性苯胺裂解，经8M 的尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，结果出现一条特征性的谱带。RIP 作用过的家蚕核糖体RNA，用50ⅢM的KBH。还原后，特异性R一片段消 失，所以可以认为这些核糖体失活蛋白是以RNAN-糖苷酶的方式作用 于家蚕核糖体的。帚曲霉素(o—sarcin)作用于家蚕核糖体后并不需 苯胺裂解，电泳后凝胶就有特异性的RNA片断谱带产生，所以n —SaFCin是以核酸酶的方式作用于家蚕核糖体的。用辛纳毒蛋白的A 链与蓖麻毒蛋白的A链作用家蚕的核糖体，结果表明二者对家蚕核糖 体的RNA N一糖苷酶活性没有明显差别。由此推测两者对家蚕毒性差异 可能是它们各自的B链所致。目前家蚕28SRNA的一级结构尚无报道， 我们根据蓖麻蚕的现有资料用计算机模拟构建了“n—Sarcin／RiCin” 结构域(SRD)可能的二级结构，并和大鼠28SRNA的相应部位进行比较， 探索了辛纳毒蛋白和蓖麻毒蛋白毒杀家蚕核糖体的分子机理。 关键词：家蚕 核糖体失活蛋白 中毒 核糖体 机理 ABSTRACT Amethodfora ofcillnalllomjnandrjcin．twokinds 1arge—sca]epreparation of II RIPsfromtheseedofcinnamomun andcastorbean．has type camphora been onacid～treated 4BWaS developed．Affinitychromatography Sepharose i tosolatedcinnamom]nandricin．Theandscaleofcinnamomin employed Yieid andrjcin methodweremuch tothis thanthose to according higher aCCO[’ding the nⅢofcinnamomin preyiOUSmethod．The620 ofricinwereextacted and850mg from500 offreshmature ricin respectivelYg seed．Thecinnamominand