二氢青蒿素对抑制人尿道瘢痕成纤维细胞增殖实验研究.pdf

Classified Index: CODE:10075 U.D.C: NO: 2008001024 A Dissertation for the Degree of M. Medicine Study of inhibition of dihydroartemisinin to the humanurethral fibroblasts cell proliferation Candidate: Ma zhi guo Supervisor: Prof. Zhao chongli Academic Degree Applied for: Master of Medicine Specialty: Surgery University: Hebei University Date of Oral Examination: Dce, 2011 摘 要 摘 要 目的： 尿道损伤及尿道手术后尿道狭窄发生率较高。至今，临床上尚无切实有效的方法治 疗尿道狭窄，始终不能摆脱狭窄-扩张/手术-再狭窄的诊治怪圈，给患者带来极大的痛苦。 尿道瘢痕组织是尿道创伤修复过程的产物，没有瘢痕就不会有创面的愈合。但是瘢痕一 旦过度生长，就会产生尿道狭窄。目前研究发现：狭窄的尿道组织存在典型的瘢痕过度 增生改变。但对引起尿道瘢痕过度增生的影响因素不是很明确，因而缺乏有效的措施阻 止尿道狭窄的发生。在对皮肤创面瘢痕形成的研究中发现：创面愈合过程中成纤维细胞 表现出强烈的增殖能力以及胶原大量分泌、沉积，所以认为成纤维细胞过度表达及胶原 的异常分泌是瘢痕产生的根本原因。成纤维细胞是最主要的修复细胞。青蒿素是我国有 自主知识产权的药物，我国正对该药进行大力开发和研究。近年发现青蒿素有较好的抑 制瘢痕成纤维细胞增殖作用。本课题旨在通过对二氢青蒿素干预后抑制人尿道瘢痕成纤 维细胞增殖的研究，以揭示二氢青蒿素抑制人尿道瘢痕成纤维细胞增殖的机制，为人尿 道瘢痕防治开辟新路，为临床预防和治疗尿道瘢痕狭窄提供理论依据。 方法： 1.采用组织块贴壁法进行尿道瘢痕成纤维细胞的原代培养，使用含 10%胎牛血清的 RPMI-1640 培养基，37℃，5%CO ，饱和湿度下培养；描述其生长曲线、分裂指数、形 2 态及波形蛋白表达。 2.采用 MTT 法测定二氢青蒿素对尿道瘢痕成纤维细胞的 IC50,采用 TUNEL 法检测 二氢青蒿素作用后尿道瘢痕成纤维细胞凋亡情况，同时采用比色法测定 caspase-3、8 和 9 在二氢青蒿素作用后的活化情况，以判断二氢青蒿素作用后是否导致尿道瘢痕成纤维 细胞中的 caspase 活化，并了解是通过哪条通路促进凋亡。 结果： 1.尿道瘢痕成纤维细胞培养成功率 75% （6/8 ）；50～66 天可传第一代，以后每 5～ 10 天可传一代，传代后生长良好；细胞为长梭形，波形蛋白表达阳性。 2.二氢青蒿素对尿道瘢痕成纤维细胞的 IC50 为 145μmol/L 。通过 TUNEL 法检测到 145μmol/L 二氢青蒿素作用于尿道瘢痕成纤维细胞后可以见到明显的凋亡细胞。通过比 I 摘 要 色法检测到 caspase-9 和 caspase-3 活化，而 caspase-8 没有活化。 结论： 1.组织块贴必法培养出的尿道瘢痕成纤维细胞可用作体外实验研究，并为进一步实 验提供了物质基础。 2.一