肾综合征出血热患者软腭粘膜对乳鼠致病性的研究.DOCVIP

临床医学论文-肾综合征出血热患者软腭粘膜对乳鼠致病性的研究 　　【摘要】　目的　探讨肾综合征出血热(HFRS)的发病机理。方法　2～3天的近交系Balb/C乳鼠，脑内接种早期HFRS重症患者软腭粘膜出血点组织悬液，用套式聚合酶链式反应检测乳鼠脑、肺及肾组织中的HFRS病毒RNA。结果　接种乳鼠发病死亡，剖检显示，发病乳鼠各器官呈现明显微血管系统和实质组织病变，乳鼠脑、肺及肾组织中HFRS病毒RNA阳性。结论　早期HFRS患者软腭粘膜出血点组织中含有HFRS病毒。 ? ? 　　【Abstract】　Objective　To expiore the pathogenic mechanism of hemorrhagic fever with renal syndrome(HFRS).Methods　2-3 days old inbred Balb/C suckling mice were inoculated intracerebrally with tissue suspension of soft parate petechia of HFRS patients and the HFRS virus RNA was tested in brain, lung and kidney tissues of sucking mice by nested PCR.Results　Some of the mice developed acute disease and died. The autopsy analysis indicated that these mice showed pathological changes in system microvascular and parenchymatous tissues. HFRS virus RNA was detected in their brains, lungs and kidney tissues.Conclusions　These results indicate that HFRS virus exists in the tissue of petechial hemorrlngic spots on soft palate petechia of HFRS patients. 　　【Key words】　Suckling mouse　　Hemorrhagic fever with renal syndrome(HFRS)　　Soft palate　　Petechia　　Polymerase chain reacti on 　　肾综合征出血热(HFRS)是一种由肾综合征出血的热病毒(HFRSV)引起的以几种鼠类为宿主的严重传染病［1］。我们曾报道了一组经血清学证实的HFRS患者，在临床上软腭粘膜均有大小不等的出血点并以此作为临床早期诊断的指标［2，3］。应用电镜技术在数例患者软腭粘膜组织中找到了病毒颗粒，胶体金检测亦呈现阳性结果［4，5］。此发现首次证实了口腔软腭磷状上皮细胞属HFRSV侵袭的靶细胞。1982年Tsai等报道经乳鼠脑内接种HFRSV可致其发病死亡，这种乳鼠模型沿用到今［6］。常规的乳鼠模型都是用HFRS病毒株使其致病，直接用出血热患者软腭粘膜组织制成悬液对乳鼠作脑内注射，目前尚未见报道。为了进一步探讨肾综合征出血热患者口腔软腭出血的发病机理及确证HFRSV的新定位，我们采取HFRS患者软腭出血点组织对乳鼠直接进行脑内接种，观察其对乳鼠的致病性。 　　1　材料和方法 　　1.1　组织取材　临床上确诊为HFRS的早期住院患者。临床分型：重型1例，中型2例(按1986年南京EHF学术会议标准)。患者的软腭均有独特的出血点于出血点处常规消毒，持活检钳夹取大小约1 mm×1 mm×1 mm粘膜组织数块，置于200目钢网上研磨。加入常规量青霉素，10%小牛血清，Eagle氏液(pH7.4)，混匀制成10%悬液，2 000～3 000 r/min离心15～20 min，取上清，液氮存放待检。取材局部粘膜用10%硝酸银烧灼止血，生理盐水涂洗2～3遍，观察片刻无出血倾向即可。 　　1.2　实验动物及分组　2～3天体重为1.55～1.65 g的 Balb/C乳鼠50只(河南医科大学动物实验中心提供)。分为5组，每组10只，第1组乳鼠脑内注射0.02 ml生理盐水；第2组乳鼠脑内接种0.02 ml重型HFRS患者软腭粘膜组织悬液；第3、4组乳鼠脑内接种0.02 ml中型HFRS患者软腭粘膜组织悬液；第5组乳鼠脑内直接注射0.02 ml A16株HFRS病毒悬液；实验组及对照组乳鼠均由母鼠喂养，逐日观察发病情况。 　　1.3　RNA的提取　实验组