SDF-1%2fCXCR4与角膜碱烧伤新生血管关系及其调节机制.pdf

华中年l技人学¨济仄学院 2003级博I论文 SDF-1／CXCR4与角膜碱烧伤新生血管的关系及其调节机制 华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科 博士研究生李鹏程 博士生导师胡燕华 中文摘要 目的探讨大鼠角膜碱烧伤后基质细胞来源的因子(stromalcell．derived 的调节机制。 方法1)建立炎症性大鼠角新生血管动物模型；用逆转录聚合酶链反应 化学染色方法检测大鼠角膜烧伤后SDF-1／CXCR4蛋白在角膜各层中的分布。2) 将碱烧伤大鼠分为治疗组和对照组，每组25眼。分别在伤后立即给予CXCR4 续2周。观察伤后7天、10天、14天新生血管面积，并用蛋白质免疫印迹观察 伤后各时间点角膜组织VEGF的含量。3)用Boyden小室法观察不同浓度的 SDF-1对培养的大鼠巨噬细胞的趋化作用，以及不同浓度的蛋白激酶C抑制剂对 表达的影响以及蛋白激酶C抑制剂对其作用的影响。4)设计合成一对针对人 PKC．‘的mRNA的寡核苷酸序列，退火后将其连入载体。对重组质粒pSIRENp 进行酶切鉴定。用脂质体介导的方法分别将干扰质粒pSIRENp转染U937细胞， 用RT-PCR检测转染干扰质粒对PKC-‘表达的影响；并检测转染前后的U937 细胞对SDF．1刺激的VEGF的mRNA转录情况。 牛中}”支人学|nJ济医学院 2003级博}论文 角膜基质层，尤其是毗邻于烧灼区的浅基质层中有大量炎性细胞浸润，浸润的炎 性细胞、角膜上皮细胞、基质细胞和新生血管内皮细胞均有SDF-1／CXCR4的蛋 显小于对照组的14．20±3．42mm2，在lO天、14天时新生血管的面积也小于对照 组，差异有显著性。VEGF的表达在各时问点稍小于对照组，差异无统计学意义。 3)SDF-1对体外培养的大鼠巨噬细胞表现出剂量依赖的趋化作用，100ng／ml时作 C抑制剂对此二效应均有抑制作用，浓度为10uM时作用最强。4)酶切证实目的 SDF-1刺激后细胞VEGF的mRNA的转录也明显低于对照。转染对照质粒对细胞 PKC-‘及SDF-1刺激的VEGF反应均无明显影响。 结论角膜基质细胞、上皮细胞和炎性细胞分泌的SDF-1与其受体CXCR4 的相互作用参与了角膜的创伤修复和炎症性角膜新生血管增殖的调控，对新生血 管的生长有诱导和维持作用。AMD3100可以抑制炎症性新生血管的形成，其抑 制作用不依赖VEGF，有潜在的应用价值。蛋白激酶C参与调控SDF-I对巨噬 细胞的趋化作用和促进VEGF表达的作用，其中PKC．‘可能通过影响NF-kappa B活性而参与调节U937细胞VEGF转录。 关键词大鼠；角膜；眼烧伤；基质细胞来源的因子；CXCR4：AMD3100： 巨噬细胞；血管内皮生长因子；蛋白激酶C：shRNA 牛中科技大学}几J济医学院 2003缀博f。论文 The between axisandcorneal SDF-1／CXCR4 relationship neovascularizationinducedalkaliburnandits by regulation mechanism of Medical DepartmentOphthalmology,UnionHospital，TongjiCollege，Huazhong ofScienceand University Technology DoctoralCandidate：Li