丹参对自杀基因旁观者效应增效作用及机制研究.pdfVIP

中文摘要 基因治疗就是将外源基因导入到正常或病变细胞中，利用其转录或翻译产物发挥 治疗作用的一种方法，是分子生物学技术在临床医学中的一项重要应用。近年来基因 治疗技术发展迅速，有希望成为肿瘤的有效治疗方法。但由于目前基因治疗研究中目 的基因的表达水平很低，而且还缺乏调节目的的基因表达组织的特异性、表达时序性 的有效手段，己成为影响基因治疗效果的严重障碍。在这种情况下，引入“自杀基因”， 设计病变细胞的自杀机制，对于抗肿瘤具有重要的实际应用价值。 使该基因的表达产物将GCV转化为GCV—TP，进而杀伤肿瘤细胞，而正常细胞则不被伤 害。该疗法的作用不仅仅引起被导入“自杀基因”的细胞死亡，而且可以通过“旁观 stander 者”效应(by effect)杀伤未导入基因的邻近分裂细胞，显著扩大其杀伤效应。 这对恶性肿瘤的治疗显得尤为重要。 末分化细胞如骨胳肌细胞，红细胞和循环淋巴细胞外几乎在所有动物中存在。GJ含有 通道，它们位于两细胞之间，可非选择性通过小分子物质，但不允许蛋白和核酸大分 子通过。GCV的代谢产物通过细胞间的直接接触进人tk一细胞，而GCV的磷酸化产物不 能自由通过细胞膜，故推测细胞间的缝隙连接是GCV的磷酸产物的通道。进一步的实 验也证明了缝隙连接在肿瘤局部旁观者效应中的作用． 系统进行小鼠肝癌自杀基因治疗的体内实验，并联合运用丹参注射液，观察联合治疗 的疗效，并运用病理学技术及免疫组化等技术初步探讨其机制，另外对大鼠的含药(丹 参注射液)血清和丹参注射液直接作用的H22细胞的cx一43的检测，进一步探讨其机制， 为建立中西医结合肿瘤基因治疗方案提供必要条件。 方法：在已建立能稳定产病毒的PT67／tk细胞株的基础上，用NIH3T3测定病毒 验，应用前药GCV及腹腔注射丹参注射液，16日后处死测肿瘤质量，通过病理切片观 察组织的病理变化，应用免疫组化技术观察肿瘤细胞Cx一43的表达，应用细胞化学法 和流式细胞术体外检测药物作用过的H22细胞的CX-43含量的表达。 结论：体内实验中，自杀基因系统联合丹参注射液显示出明显的协同抗肿瘤效应； 丹参注射液增效作用的机制与增强cx一43的表达而增强了旁观者效应密切相关；联合 组肿瘤细胞CX一43的含量表达增多。体外实验中，细胞化学法和流式细胞术检测到肿 瘤细胞的cX一43的含量表达同样增多。实验证实丹参注射液对自杀基因疗法具有增效 作用，通过进一步实验证实后，可望成为肿瘤基因治疗的新方案。 关键词肝癌：自杀基因；Hsv-tk基因；丹参注射液：缝隙连接蛋白；血清药理 学 II oftanshn Enhanci effect i onSui ci deGene effect ng bystander andthe mechani smstudy ofOhinese Be andWesternMedioiBasis SpeciaIity：Integration Author：llenIYue ing Tutor：AssociateProf．Tii Zhong ngj Abstract Gene an roleinclinic frommolecular therapyplaysimportant coming couldmakeeffectwiththetranslationoutcome biologytechnique．It bytaking exterior normalorsick