木素过氧化物酶和乙二醛氧化酶共固定化及在手性合成中应用.pdf

木素过氧化物酶和乙二醛氧化酶的共固定化 及在手性合成中的应用 摘要 本文首先对限氮培养基在富氧环境下培养黄孢原毛平革菌问时合 裁本素过氧讫物酶秘乙二醛氧化酶您条件进李亍了磋究，在此基鹚上磷 究了双酶的初步分离纯化、共固定化以及在手性合成中的应用。 本文采用限氮培养基在寓氧环境下培养黄孢原毛平革菌合成木素 过氧化物酶和乙二醛氧化酶，实验震明：葡萄糖和酒石激铵分别为最 佳碳、氮源；最佳碳滋浓度为15 gm窥10gm时；最佳氮源浓浚为0．2 g／L和O．3g／L(分别对应于木素过氧化物酶和乙二醛氧化酶的合成)； 最佳维生素Bl、Tween一80和苯甲醇浓度分别为3mg／L、0．05％和5．0 鐾为50％，最德逶氧频率为1次／天，最佳摇庶转速为80rpm，最佳接 种量为3×107／瓶，最佳温度为37。C。在最优培养条件下，木素过氧化 物酶和乙二醛氧化酶的酶活分别达到448．3U／L和27．34U／L。 采阁先除多糖，再超滤浓缩，最后盐析的方法对木索过氧化物酶 繇乙二醛氧化酶进行了初步懿分离纯纯。结果表明：1／3体积麴冷蠢酸 和一次冻溶为最佳除多糖方法；超滤浓缩后的酶液在60％饱和硫酸铵 浓度下的盐析效果最佳，木紊过氧化物酶和乙二醛氧化酶均获得最高 l3．63U／g。 的比酶活，分剐达6042．6U／g和5 选取壳聚糖作载体，戊二醛作栽体的活化剂对木素过氧化物酶和 乙二醛氧纯酶进行共围定化。实验表明：采用先活纯载体后共价结合 酶魏顺序比冠时活化秘共馀好；戊二醛作溪亿剂跑乙二醛好；最佳耀 酶液加量为30mI／0．49载体：最佳戊二醛浓度为0．2％；戊二醛最佳处 理时间和酶的最佳固定化时间均为10h。固定化后，木素过氧化物酶和 乙二醛氧化酶的酶活阐收率分别达鳓了81．4％和45．2％。 应溺本素过氧化物酶对强个代表性瓣手性物壤——B戳0毛(辘手 。陡)和苯甲亚砜(点手性)在水互溶有机溶剂单相体系中的催化合成 进行了研究。结果表明：两产物均为R型产物；底物2．蔡酚和苯甲硫 热方式，对于苯甲翌蹶戆合戏最缓¨鸯羹量为0．4ml H202(0．12旧，对予 BINOL的合成则为O．5ml H202(O．12％)；最健的有机共溶剂为乙膳；反 应温度和甲基乙二醛的添加对于两产物的ee和得率影响均较大；最佳 酶形态对于合成苯甲媛砜的反应为阐定化酶，对予合成BINOL的反应 为游裹酶。在优化弱健讫条件下，B1NOL积苯翠亚酝的得率分别为 30．1％署1t36．9％；ee分别为74．6％茅1159+8％。 关键词：木素过氧化物酶，乙二醛氧化酶，共固定化，手性合成，1’l。 联．2．萘熬，苯零耍酝 STUDYoN CoIMMOBlLIZATIONOFLIGNIN PEROXlDASEAND ANDT壬薹ElR GLYoXALOXIDASE ApPL薹CATlONlNASYM醒E譬l娃CSYNTHESIS ABSTRACT Inthis thesis，lignin peroxidase(LiP)andglyoxal werefirst the Phanet’gchaete white—rot production producedby fungus SIlL一1in two chrysosporiumN—limitingcultures。Secondl)；theenzymes were