胚胎发育相关基因—EDAG诱导表达及蛋白纯化.pdfVIP

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2017-09-06 发布于安徽
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中国医学斟学院中国协和医科大学硕士研究生论文胚胎发育相关基因一EDAG的诱导表达及蛋白纯化攘簧 Associated 躯艟发育相关綦因(物b巧碱cDevelop G鼬e， EI)AG)是新近发现的造血相关基因，该基因定位于染色体9q22，是从4月龄人胚胎组织与成年肝组织的差异熬因ETS库中分离得剃的。 EDAG基因在人体内的表达凝有时空依赖镶：在逡盘活簌瓣缝绫如精黪、成人夤麓中骞表达，同时也赢表达于CD34+纲胞及人自血瘸细胞系K562中。研究表明EDAG具有恶性转化活性，与维持细胞的未分化状态有关。最近的转基因小鼠研究表明，在小鼠造血细胞中过表达蠢DAG可导致造血干细胞增殖分纯紊蘸。突出表现在髓系造盘增强，濑墨系遮盘挪铡，并避现典型鳆髓系增生综合症，提示EDAG是一种参与造血组织发育与分化调控的燕要基因。迄今为止，EDAG调控造血细胞增殖、分化及凋亡的分予机制尚不明确。鉴予EE}AG是～种薪发现的蘩匿，瓣莆既无意晶貔戆蛋囊亦秃抗俸爰予其蛋是承平的研究。我们成功豹构建了带有His标签 BL21(DE3)中诱导出鬣白的寝达。同时我们通过反复的摸索确定出适并筛选窭了嚣株表达较熹的单克隆。并且确定了纯化条{牛，最终纯化 Blot鉴定，结果证也EDAG蛋白。最后我们用抗His抗体作westem 实纯化出的单一条带确实为诱导表达的EDAG蛋白。这为避～步带《空里垦堂数兰堕皇塑塑塑垦戤盔堂堡点竺坚生塑苎—— 各EDAG抗体，检测该基因在组织、细胞中蛋白水平的表达，从而了解其功能和作用机制奠定了基础。关键词：黝AG，原核发达载体，蛋融纯化 ABSlRACT 转 a魏∽醴撞ssoei戮d 浮DAG) 酾elop ge藏e Em吣。珏ic toc}娃Dmosome associa搪d is 9q22·It m印ped he凇鑫主opoiesis gene．EDAG wasidentified difference byrepresen诅tional EDAG inme∽tive indicatemat liver．Studies eXpressed fetala11dadult m鞘奄w，褪蘸越so sue董l鑫s融蠢liV雠a芏ld融魏b熊e hemat婶oi靠co糟垃|ls hasme celllineK562。EDAG activ姆 leukemia gene ineD34十cells黼d to andis relat