川芎嗪拮抗庆大霉素耳毒性作用实验的研究.pdfVIP

中 文 摘 要 前 言 、众所周知，氨基糖贰类抗生素(Aminoglycosidicantibiotics, Am)对肾及耳有极大的毒性，常可造成肾功衰场、听力障碍、平 衡失调等副作用，极大的限制了它的使用。其中庆大霉素(Genta- micin,GM)耳毒性发生率在6一16%之间，而前庭毒性发生率在9 一巧%之间。即使这样，庆大霉素仍在临床上广泛应用，并且研究 其耳毒机制的报告也经久不减。因此，世界各国学者针对氨基糖 贰类抗生素耳毒机制的各种学说使用氧自由基清除剂、铁离子鳌 合剂、一氧化碳、谷胧甘肤等多种药物防治其耳中毒均取得了一定 效果。近来，国内有学者使用目前广泛应用于心血管疾病临床治 疗的中药川-40(Ligustrazine,TMP)治疗氨基糖贰类抗生素耳中 毒、突发性耳聋、老年性耳聋、阵发性位置性眩晕、美尼尔氏病等耳 部疾病已取得了显著成效。一氧化氮合酶(Nitricoxidesynthase, NOS)是一氧化氮(Nitricoxide,NO)合成的关键酶，它在哺乳动物 内耳的表达和分布是目前学者们研究的一个热点问题。并且文献 报道在庆大霉素耳毒过程中包含了NOS及NO因素。因碱琢卖 验从上述问题着手，基于川夸嚓广泛的药理作用和临床疗效，研究 川曹嗦对庆大霉素耳中毒豚鼠NOS的影响，同时研究川芍嗦是否 对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗外毛细胞和血管纹结构有保护作用， 从而进一步探讨其防治庆大霉素耳毒性的机制。 材 料 与 方法 材料:取耳廓反射正常、听阑正常的32只健康白色红目豚鼠， 体 230一300克，雌雄不拘。随机分成4组，每组8只，其中庆大 ·1· 百 争 彩 子 仑 荟 兮 ‘ “ 悉 伦 苦 公 扮 加 手 乏 2 瓜 吃 震 毛 平 ~ 准 之 澳 霉素组(耳毒模型组):注射GM100mg/Kg;联合用药组:注射GM 专 ︸ 击 ， 窦 宁 100mg/Kg，同时注射TMP140mg/Kg;JIj-4 组:注射TMP140mg/ 承 寺 溉 贾 Kg;对照组:注射等量生理盐水。所有组均连续腹腔用药10天。 宕 比 沦 r 了 艺 方法:(1)ABR检测:用药前和用药后将豚鼠用1%的戊巴比妥钠 劲 玉 ‘ 拓 ， 40mg/纯腹腔麻醉，利用Danac-7型声刺激器发出频率以2KHz 今 主 ， 兔 为主的。lick声刺激信号，测试强度由95dBSPL开始，接近闹值后 抓 省 今 卜 ‘ 按5dB逐档递减，观察P3波以确定听闹。(2)酶组织化学技术: 墩 矛 ￡ 乳 于 将豚鼠快速断头，速取左侧听泡，暴露耳蜗，在解剖显微镜下刺破 ‘ 风 沪 盔 少 尸 ‘ 圆窗膜与卵圆窗膜，在蜗顶钻孔，缓慢注人含4%的多聚甲醛的 金 尔 、 头 汾 气 ‘ PB液(0.1moVL,pH=7.4)，固定耳蜗2小时。放人10%的EDTA ‘ 洲 了 ‘ 飞 它 、 声 (pH=7.4)液中在4℃冰箱中脱钙7天，移人25%的蔗糖磷酸缓 奋 ‘ 小 傲 冲液中4℃过夜，准备切片。次日将标本用OCT包埋，恒冷切片机 温度调到一2490，平行于耳蜗轴行20N.m冰冻切片。将切片放人 由1mg/mlNADPH一d,0.5mg/mlNBT,0.15%TritonX一100组 成的酶组化反应液中3790孵育2小时15分钟，常规梯度脱水，树 胶封片。使用LUZEX一F型显微图像分析系统，测定NOS阳性反 应产物的平均灰度值。(3)电镜技术:同上述取右侧耳蜗标本用 2.5%戊二醛固定4一6小时后，取下基底膜和螺旋韧带分别用于 透射和扫描电镜标本制备和观察。所有实验数据以均值*标准差 (E:土。)表示，统计分析使用两样