骨肉瘤多药耐药相关蛋白(MRP)表达及意义.pdfVIP

中文摘要 ～／ 面一差乡’ f多药耐药(Multidrug 构无关的化疗药物产生交叉耐药的现象，是导致许多肿瘤化疗失 败的主要原因，研究表明，MDR包括以下几种表现形式：(1)典型 MDR，即，多药耐药基因(MDRl)及其编码的细胞膜P_糖蛋白 (GST)活性增加，即谷胱甘肽和谷胱甘肽代谢酶增加，使肿瘤细胞 构异常，DNA损伤后修复能力增加；(4)多药耐药相关蛋白(Mul— resistance—associated tidrug Protein，MRP)基因的扩增或过表达； 基因及其表达产物研究较多外，其它均处于初步研究阶段。最近， 多药耐药相关蛋白基因的克隆成功，使MRP成为多药耐药研究新 的热点吖 ／ 骨肉瘤转移旱i预后差，对放化疗不敏感，是严重危害青少年 身体健康的恶性肿瘤。已有研究表明，P一糖蛋白介导骨肉瘤的 多药耐药现象是骨肉瘤化疗失败的原因之一，但其阳性表达仅 46％—55．1％，骨肉瘤的其它耐药机制还不十分清楚。 本实验应用免疫组化技术，检测骨肉瘤中MRP的表达，探讨 其在骨肉瘤耐药中的作用机制及对预后的影响，以便进一步完善 对骨肉瘤耐药机制的研究，为临床用药和进一步逆转骨肉瘤的 MDR现象提供理论依据。 ～(实验材料 (一)标本：中国医科大学第一l临床学院及辽宁省肿瘤医院 病理室内1993年7月至1998年12月骨肉瘤石蜡标本，选材符合 以下条件。l、再次经病理专家确认诊断(不包括皮质旁骨肉瘤)。 2、术前未行放化疗。3、有完善的随访资料。 (二)病例资料：符合上述条件病例共52例，男性：29例，女 性23例，年龄10岁_5l岁，中位年龄19．5岁。股骨下段3l例， 胫骨上端14例，股骨上段2例，肱骨上段5例。成骨细胞型39 例，成软骨细胞型4例，成纤维细胞型4例，其它类型5例。按En- 方式按Ermeking外科分期，分别施行广泛切除+保肢术，或根治 性切除截肢术。 (三)试剂：鼠抗人MRP单克隆抗体，购自北京中山生物技 术公司。 二步法免疫试剂购自上海长岛抗体诊断试剂公司。 实验方法 (一)免疫组化染色：51_Lm石蜡切片常规脱蜡、水化，3％过氧 化氢溶液室温10分钟，蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟，再经PH6．0 枸椽酸缓冲液高压抗原修复。加入MRP一抗，(MRPrl工作浓度 l：50)40C过液。滴加辣根酶标记链霉卵自素工作液，室温30分， DAB染色，苏木素复染，常规封片，每次实验用PBS代替MtLPrl做 阴性对照。 (二)结果判定：以OLYMPUS生物显微镜观察染色切片，以 细胞膜(或浆)呈棕黄色至深棕黄色颗粒为阳性细胞。根据切片 ·2· 中阴性细胞的百分比，分为弱阳性(阳性细胞10％_25％)、中度 阳性(阳性细胞26％_50％)和强阳性(阳性细胞50％)。 (三)数据处理：采用x2检验，用SPSS7．0医学统计软件。 进行统计学处理。Kaplan—Meier比较生存曲线。 实验结果 (一)52例骨肉瘤组织中，MRP总的阳性表达检出率为40．4 (21／52)，MRP在骨肉瘤细胞膜及胞浆中均有表达，主要位于细胞 临床分期，病理类型相比，差别无显著性(P0．05) (二)本组病例平均随访42．5个月，平均无瘤生存18．5个 月，乎均生存期31．2个月，死亡22例(42．3％)，一年生存率 显低于阴性患者(P0．05)。 后三年生存率38．2％(7／18)，丽MRP阴性患者三年生存率76． 9％(20／26)。术后化疗患者MRP阳性者生存期明显低于阴性者 (P0．05)非化疗组因病例数较少，结果难以判定。‘ 讨 论 多药耐药是一个非常复杂的现象，有多种因素共同参与构成， MRP只是其中之一，它的发现为肿瘤耐药研究带来新的希望，同 ·3· 时也带来更多急于解决的问题。目前尚不能明确MRP表达一般 规律，进一步研究需阐明MRP表达局