空肠弯曲菌peb1A基因原核表达载体的构建和表达.pdfVIP

遵义医学瓣2005霜蘩圭雅竞耋学燕瓷室 臻究生较鼗蜂 导辩孙万热 空肠弯曲茵peblA基因原核表达载体的构建和表达 中文摘要 目的：克隆空肠弯曲菌peblA基阑，构建peblA基因原核表达载体并进行表达。 为空肠弯曲菌的基因工程疲菌研究的基锻实验打下基础。 方法；(i)原核表遮羧俸韵掏建觳豁定：PCR扩增空弱弯弱麓pebtA蘩溺，扩增 I和Xho I双酶切后，分别用胶回收试剂 产物和质粒pET-28a(+)用BamH 斑回收目的片段，将载钵秽霹鲍插入片段按1：3的e＆铡鼹T4连接戆进行 转让的菌液涂布于食卡那霉素的LB琼§跨平板上培养避夜，然后从LB璩 l籍平板上糖鞭融性尧淹按鼙争予LB滚体墙养基串增整。铺提质粒进行双酶 切鉴定和PCR初步鉴定，缀初步鉴定后j挂行测序鉴定。 级蛋白PEBI的表达量并对其进行初步的分析。 结果：(1)空瑟弯鼗麓r,eblA基戮PCR扩增产物遴嚣1．5％璩月鏊糖凝胶瞧泳，产 物为单一祭带，大小约为720bp。用特异穗引物对重缀质粒 达出脑‘为29KD左右缒重组蛋自。SDS．聚丙烯酰胺凝胶电泳分析鼹示， IPTG诱导4h重组蛋白的液达量最高，表达量占全黼僚白质的33％，经 Ni-NTA拄缝侏，获褥纯度羚96％夔重缝激鑫。 熬因工程疫苗的研制奠定一定的基础。 关键词。空肠弯曲黼p曲lA基因载体构建原核表达 壅墨篓兰煞i塑!垄璧兰鐾塞塞堂垒篓塞． 登茎釜墼鏊壁——』釜鳖I薹型墅————～—— vectorof of the gene Construction peblA of expression prokaryotic its andexpression Campylobacterjejuni Abstract Toconstl凇ct vector expressioncarrying Objective pmkaryotic forthefurther it Tiffs thefoundation and i纛E．cotL lays gene express peblA of vaccine- engineering developmentC．jejunigenetic ofthe vector：． identification and prokaryoticexpression Methods≤1)Construction was PCR and Prokaryo