异源韧皮部特异启动子在转基因枳中的表达_许兰珍.docVIP

园  艺  学  报  2014，41（1）：1–8  http：// www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail：yuanyixuebao@126.com  异源韧皮部特异启动子在转基因枳中的表达 许兰珍，彭爱红，何永睿，姚利晓，雷天刚，刘小丰，姜国金，邹修平*， 陈善春* （西南大学柑橘研究所/中国农业科学院柑橘研究所，国家柑橘工程技术研究中心，国家柑橘品种改良中心，重庆 400712）  摘  要：为了筛选在柑橘韧皮部中特异表达的启动子，构建 GRP、Rolc、RSSl 异源韧皮部特异启动 子控制 GUS 报告基因的植物表达载体，转化枳[Poncirus trifoliata（L.）Raf.]上胚轴。GUS 组织化学染色 分析表明，3 个启动子均显示了维管束组织特异性。其中，GRP 启动子活性强，且具有严格的韧皮部组织 特异性；Rolc 启动子活性最强，在根和茎中呈组成型表达；RSSl 启动子活性最弱。Real-time RT-PCR 和 GUS 酶活性分析进一步证明了 GRP 启动子具有较强的韧皮部组织特异性，该启动子有望应用于柑橘抗黄 龙病基因工程育种。 关键词：枳；韧皮部特异性启动子；遗传转化；GUS 中图分类号：S 666 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2014）01-0001-08  Expression Analysis of Three Phloem-specific Promoters in Transgenic Poncirus trifoliata XU Lan-zhen，PENG Ai-hong，HE Yong-rui，YAO Li-xiao，LEI Tian-gang，LIU Xiao-feng，JIANG Guo-jin，ZOU Xiu-ping*，and CHEN Shan-chun* （Citrus Research Institute，Southwest University；Citrus Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences； National Citrus Engineering Research Center；National Center for Citrus Varieties Improvement，Chongqing 400712， China） Abstract：For screening phloem-specific promoters in citrus，the plant expression vectors containing GUS reporter cassette driven by Glycine-rich protein gene promoter（GRP）from Vigna unguiculata（Linn.） Walp（bean），Agrobacterium Rhizogenes RolC gene promoter（Rolc）from Agrobacterium rhizogenes and Sucrose synthase 1 gene（RSSl）promoter from Oryza sativa（rice）were constructed，and introduced into the Poncirus trifoliata（L.）Raf. seedling epicotyls by Agrobacterium-mediated transformation. Histochemical β-glucuronidase（GUS）analysis revealed vascular-specific expression of the GUS protein in citrus. The GRP promoter displayed strong and strict phloem-specific expression pattern in this study while the RSS1 promoter could drive low levels of GUS gene expression in citrus. Strong constitutive expression 收稿日期：2013–08–30；修回日期：2013–12–11 基金项目：国家自然科学基金项目；长江学者和创新团队发展计划项目（PCSIRT）；国家高科技研究发展计划（863 计划） 项目（2011AA100205）；国家现代农业产业技术体系建设专项资金项目