HPLC法测定阿司匹林中游离水杨酸含量.pptVIP

HPLC法测定阿司匹林中游离水杨酸含量 戴云坚 殷炜铭 邵加安 陈铁刚 背景 阿司匹林是一非甾体类解热镇痛、抗炎、抗风湿药物。在其生产过程中乙酰化不完全或储藏过程中水解产生的水杨酸对人体有毒性.因此有必要对阿司匹林中的水杨酸进行限量和含量的测定。《中国药典》一直沿用对照品化学反应目视比色法判断结果，此方法当对照品溶液与供试品溶液颜色相近时易造成判定误差。此次实验设计HPLC法检查阿司匹林中的水杨酸。 实验仪器及试药 仪器 agilent高效液相色谱仪,岛津LC-10A(单泵)高效液相色谱仪；量筒,移液管，容量瓶。 试药 阿司匹林样品、 水杨酸对照品、冰醋酸、无水甲醇、超纯水。 实验方法 色谱条件 色谱柱：C18色谱柱（4.6X150mm）；流动相：1%冰醋酸-甲醇(50：50)(组1),甲醇：水：冰醋酸(8：4：1)(组2) ；检测波长：300nm；流速：0.8ml·min-1；柱温：室温 系统适应性 水杨酸及阿司匹林的高效液相分离图谱及保留时间的确定: 分别取水杨酸对照品溶液、阿司匹林供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。 组1 组2 水杨酸精密度试验 　按溶液配置中的方法配置水杨酸对照品溶液，从溶液配置到进样，重复6次，计算水杨酸峰积分面积的相对标准差（RSD≤5%）。 水杨酸的线性试验 组1 组2 组２：回收率试验结果 水杨酸峰面积与时间的变化率（竖轴为峰面积，横轴为时间） 水杨酸峰面积与时间的变化率（竖轴为峰面积，横轴为时间） 外标法测定阿司匹林中水杨酸含量 水杨酸对照品0.1g 外标法测定阿司匹林中水杨酸含量 水杨酸对照品10mg 讨论 １.流动相的选择 本实验两个流动相相比较, 1%冰醋酸-甲醇(50：50)(组1）理论塔板数与分离度教好，甲醇：水：冰醋酸(8：4：1)(组2)对称性较好，但有杂峰。 ２.组２所用仪器没有信噪比参数，所以没有确定检测限。 ３.从分子结构上分析水杨酸中含有羟基和羧酸，而阿司匹林中仅含有一个羧酸且有酯的结构，但从色谱分析中，阿司匹林的保留时间却小于水杨酸的，就其原因可能是因为水杨酸的分子内间氢键大大减小了它的极性所致。 ４.在做样品的稳定性实验时，发现阿司匹林的稳定性都不好，特别是组1阿司匹林的水解率很大，且随时间变化呈一定的线性关系，原因可能有以下几方面：一是溶液配置过程太长，导致水解发生；二是所配溶剂酸性控制不好，导致了阿司匹林的水解。由实验可知用冰醋酸：甲醇(1：10) (pH值约为2．4） 做溶剂相比1%冰醋酸-甲醇(50：50)可一定程度抑制阿司匹林水解． 解决方法:一.在实验过程中确定阿司匹林的有效稳定时间，在这段时间内进行水杨酸含量的测定。 二.改用其他溶剂,像乙腈一甲酸(99:1)溶液作为本方法测定溶剂. ５.检测波长的选择 　由文献可知，水杨酸对照品溶液在(303±2)、(236±2)nln的波长处有最大吸收，阿司匹林对照品溶液在(276±2)、(226±2)nm的波长处有最大吸收。分别用水杨酸的最大吸收236、302nm的波长作为检定波长，做阿司匹林供试溶液的液相分离色谱，结果显示，用236nm作为检定波长时，水杨酸响应灵敏度高，溶剂、阿司匹林的响应灵敏度更高，得到分离色谱响应因素也多，所得分离色谱不理想；用303nm作为检定波长时，水杨酸响应灵敏度虽有所降低，但溶剂、阿司匹林的响应灵敏度大大降低，得到分离色谱可达到基线分离，响应因素也少，有利于水杨酸的测定。 * * 溶液的配制 水杨酸对照品溶液：水杨酸对照品0．1g 100mL量瓶 取此液1.0ml 100mL量瓶 10μg/mol 阿司匹林样品溶液： 阿司匹林对照品0.1g 100mL量瓶 1mg/moL 组2: 冰醋酸：甲醇（1：10） 组1: 1%冰醋酸-甲醇(50：50) 最低检出限试验(组1) 精密吸取水杨酸对照品溶液，用流动相逐级进行稀释。当记录的色谱图中信噪比为10：1时。确定水杨酸的定量限，信噪比为3：1时确定检测限。噪音信号为2.1ng/ml，检测限为6.3ng/ml。 进样 峰面积 峰面积/浓度 平均（峰面积/浓度） RSD（%） 1 801746.8 80174.68 80515.8 0.38 2 802056.1 80205.61 3 807673.3 80767.33 4 804326.7 80432.67 5 805846.9 80584.69 6 809299.3 80929.93 进样 浓度（μg/ml） 峰面积 峰面积/浓度 平均（峰面积/浓度） RSD（%） 1