志贺氏菌链霉素依赖菌株回复突变的研究I.体外回复突变率.pdfVIP

第6卷 第2期 遗 传 学 报 Vol.6,No.2 1979年 6月 ACTA GENETICA SINICA June,1979 志贺氏菌链霉素依赖菌株回复突变的研究 L体外回复突变率 杨正时 张秀文 卫（生部药品生物制品检定所，北京） 南斯拉夫Mel氏应用志贺氏菌链霉素依赖菌株 (Streptomycin-dependentShigellastrains, 以下简称 sd）制备口服痢疾活菌苗进行预防菌痢的现场效果考核，取得满意的结果LI-al0 目前，国内已引进南斯拉夫福氏志贺氏菌2a(Shigellaflexneri2a)Sd菌苗株，并选育出国内 常见流行型福氏志贺氏菌lb,3a,4a及宋内氏志贺氏菌(Shigellasonnei）的S“菌株，进行 口服预防效果观察。 一般认为s-〔71，Sd菌株口服后在肠道中不能繁殖，丧失侵入肠道粘膜上皮细胞的能力， 因此它被认为是目前减毒株中毒力最低的菌苗株。但是已观察到Sd菌株可以在不含链 霉素的营养琼脂平板上生长出单颗菌落。这种对链霉素重新不依赖的回复突变现象在Sd 菌株中是否具有普遍性，回复突变株是否会引起毒力升高而返祖为有毒株，这是有关菌苗 安全的重要问题。本文着重研究回复突变的发生频率与其影响因素，讨论回复突变株 （以 下简称Srev株）与Sd株鉴别的基本特征，旨在探讨Sd菌苗株安全性的实验室检定方法。 材料和方法 菌株 sd菌株31株，其中的南株 菌（号为，1274）是 1973年从南斯拉夫引进的福 氏志贺氏菌2a单价口服菌苗中分离的。其余30株均为国内有关单位选育后赠送我所的 表（ 1)。这些菌株的原始出发株大多为链霉素敏感株 S（S)。其选育过程一般是将这些菌 株的琼脂培养物大量涂种于含链霉素 每（毫升培养基中高于400微克）的营养琼脂平板 上，经370C,1-2天培养后，将生长的菌落逐个挑出纯化鉴别，除去耐链霉素 (S（r)突变 株，挑选的Sd株在含链霉素培养基上每天传代，一般传20--30代，也有传到100代以 ＿上。 培养基 牛肉汤培养基为牛肉浸液 (（1:3)1,000毫升，蛋白陈10克，氯化钠5克， 15磅30分钟灭菌，最终pH7.2-7.4o 营养琼脂是于上述牛肉汤培养基中加人琼脂20 克。倒平板或制备中管斜面用。伊红一美蓝琼脂成份是蛋白陈10克，氯化钠5克，肉膏3 克，蒸馏水1,000毫升。溶解后调pH为7.6，加人琼脂，加热融化，抽气过滤后加乳塘20 克，.,务伊红15毫升，0.5外美蓝20毫升，10磅20分钟灭菌。本文中所述的各种含链霉 素培养基均加人用灭菌蒸馏水稀释的硫酸链霉素，最终浓度为每毫升培养基 中含有400 微克。 本文于1978年3月13日收到。 2期 杨正时等：志贺氏菌链霉素依赖菌株回复突变的研究I．体外回复突变率 173 表1S“试验菌株现况 Table1 PresentstatusofSdteststrains 菌 株 号 型 别 卜 nntig#nen绪iefsormula 含链霉素琼脂上传代次数 No.ofstrains Types No.ofpassageson streptomycin agar 75一10 ｝ Shige“一 ‘rnitzi ｛ A2 20-30 27