山葡萄SRAP技术体系的建立及其在品种鉴定中的应用.pdfVIP

吉林农业大学学报 2013，35(2)：198—205 http：／／xuebao．jlau．edu．Cn JournalofJdinAgriculturalUniversity E-mail：flnd~b@v!p．sina．tom 山葡萄 SRAP技术体 系的建立及其在 品种鉴 定中的应用 金炳奎，宗成文 ，曹后男，朴日子，许 雪 延边大学农学院，延吉1331302 摘 要：以6个不同的山葡萄品种为材料，对山葡萄SRAP分子标记技术体系进行优化，探讨 SRAP标记在 山 葡萄品种鉴定中的可行性。结果表明：SRAP扩增程序为94℃预变性5min；前5个循环，94℃变性45s，35℃ 退火45s，72℃延伸90s；后35个循环，94℃变性45s，5O℃退火45s，72℃延伸90s；最后72℃延伸7min。反 应体系：25 总反应体系中含模板 DNA20ng，dNTP1．0 ，上下游引物各 1 ，rraq酶0．2 ，10倍Buffer 1．0 ，其余用灭菌的ddH20补充。应用筛选出的 16对引物对6个 山葡萄品种进行扩增，共扩增出96条条 带，其中多态性带占67．71％。每个品种都能找出其特有条带，最少用2对引物就可鉴别6个山葡萄品种。 关键词：山葡萄；SRAP；体系建立；品种鉴定 中图分类号：$663．1 文献标识码：A 文章编号：1000-5684(2013)02．0198．08 网络出版地址：http：／／www．cnki．net／kcms／detai1／22．1100．S1305．011．html 引文格式：金炳奎，宗成文，曹后男，等．山葡萄SRAP技术体系的建立及其在品种鉴定中的应用[J]．吉林农业 大学学报，2013，35(2)：198．205． EstablishmentofSRAP—-PCRSystem andVarietyIdentificationonV／ts／ amurensis JINBing—kui，ZONGCheng—wen，CAO Hou—nan，PIAO Ri—zi，XUXue AgriculturalCollegeofYanbianUniversity，Yanji133002，China Abstract：With “zuoyouhong”andfivedifferentcultivarsofgrapeasmaterials．theoptimizationofSR molecularmarkersystem ofVitisamurensiswascarriedout，andthefeasibilityofSRAPmarkerinidenti一 nggrapecuhivarsWaSdiscussed．Themainresultsareas follows--SRAPamplificationprogram：94oC denaturationfor5min；thefirst5cycles，94 ℃ denaturation45S，35oCannealing45S，72oCexten． sion90S；after35cycles，94oCdenaturation45s，50℃ annealing45S，72oCfor90S；laSt72℃ ofr 7min．Reactionsystem：25ttL totalreaction system containingtemplateDNA 20ng，dNTPs1．0 L， upstrema anddownstream pfimem each1 L，TaqDNApolymerase0．2ttL，10X Buffer1．0 L，hte otherwit}lddH，Oadded．Ninety—sixbandswereproducedfrom sixdifferentcultivarsofV／t／samurensisby 16pairsofselectedprimers，nadthepercentageofpolymorphiebands(PPB)Was 67．71％．Each specieshaS itsuniquebnad．atleastwiht 2pairsofprime