不同类型Bt棉根系中杀虫蛋白动态变化规律研究.pdfVIP

植物保护科技创新与发展 不同类型Bt棉根系中杀虫蛋白动态变化规律研究’ 雒琚瑜崔金杰赵 清 陈海燕 王春义 (中国农业科学院棉花研究所，安阳455000) 摘要：研究明确了不同类型转基因抗虫棉不同时期根系中杀虫蛋白含量的动态变化规 律。研究表明，Bc棉和转双价基因棉根系中杀虫蛋白的含量变化趋势基本襁同，帮棉花生长 的前期(5—7月份)含量较高，中期(8—9月份)含量明显下降，后期(10一12月份)含 量急剧下降，次年l一3月份，含量缓慢下降，至次年4月份检测不到杀虫蛋白的含量。两种 不同类型转基因抗虫棉相比，5—9月份及11月份Bt棉根系中杀虫蛋白的含量均高于双价棉， 7月份差异达到显著水平；10月份，双价棉根系中杀虫蛋白的含量高于Bt棉；12月份两种不 同类型转基因抗虫棉根系中杀虫蛋白的含量相同；次年I一3月份，双价棉根系中Bt杀虫蛋 白含量均明显高于Bt棉。 关键词：转Bt基因棉；转双价基因棉；Bt杀虫蛋白 近年来，转基因抗虫棉种植面积迅猛发展，至2007年我国转基闵抗虫棉的面积达到 380万hm2，占我国棉花面积的69％。与此同时，转基因抗虫棉长期种植后的环境安全性 问题也备加引人关注…。土壤是生态系统中物质循环和能量转化过程的重要场所，研究 表明转基因植物的外源基因表达的Bt毒蛋白可以通过植株残体、根及根系分泌物和花粉 的散播等途径进入土壤生态系统，在土壤中积累，导致土壤特异生物功能类群以及土壤中 微生物多样性发生改变，甚至产生级联效应，最终导致生态系统功能的改变口娟j。 因此，研究转基因抗虫棉根系中杀虫蛋白含量的动态规律，对于了解抗虫棉根系中杀 虫蛋白的分泌和降解动态，防范和降低潜在的生态风险，防患于未然，为转基因抗虫棉的 安全性评价积累科学数据。保护人类健康和生态环境安全，保障抗虫棉的安全应用和持续 利用，保障生物技术的健康发展具有十分重要的意义。 1材料与方法 1．1试剂与药品 x10-9 Ac酶联免疫试剂盒(购于中国农业大学作物化学控制室)，其定量检测极限为0．5o 1．2试验材料 益性研究项目(nyhyzx07-005) 作者简介：雒瑶瑜(1978一)，助理研究员，从事棉花害虫防治技术及转基因植物环境安全研究 研究论文 683 中23)。 1．3试验处理 试验按随机区组设计，每品种种植3个小区，4个品种共12个小区，小区面积 为33．3m2。 1．4试验方法 1．4．1 材料种植 试验材料种植在河南省安阳市中棉所试验农场，播种日期为4月25日，种植密度为 行距80era，株距27era，常规农事操作，棉花全生育期不使用任何化学农药，棉花收获后 棉株保留在田间继续进行试验。试验在2005年和2006年两年进行。 1．4．2棉花根系采集与处理方法 分别于当年的5—12月份及次年1—4月份的15El，采集根系。采用随机3点取样方 法，采集根系，每点采集3株，每小区3个样点共9株。采样后，迅速对根部进行处理， 具体方法为先轻微抖掉采集的根系周围土壤，用蒸馏水将残留在根系上的土冲洗干净，用 吸水纸吸干根系表面的水，用灭菌的剪刀剪下侧根和主根根尖，将其放人保鲜袋中。然 后，放入一80℃超低温冰柜中保存，待测。 1．4．3 Bt杀虫蛋白含量测定 棉花根系中Bt杀虫蛋白测定具体步骤： 0．1929，NaCI 管中，摇匀后放置在4℃下。在4℃下提取4h或过夜，5 用于测定。 (2)样品中Bt杀虫蛋白测定的具体步骤参照王宝民的方法一J。 ①将标样用样品提取液稀释1 个梯度(包括0ng／n11)。 ②在酶标板上每孔加1001咀1，每板上只作两条标准曲线。随后加入样品上清液，每孑L 100斗1，每个样品重复3次。 ③将包被好的酶标板放人内铺湿纱布的带盖瓷盘中(盒内不见明水)，包被 37℃、3h。 ④将包被好的酶联板取出，甩掉包被液，用8通道加样器每孔加入150Ixl洗涤液 (NaCI8．09，KH2P04 T