鸡α干扰素%2f白细胞介素2嵌合基因的构建、融合表达及生物学活性研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会论文集 [2]吴清民主编．兽医传染病学．北京：中国农业大学出版社，2002， SPF鸡可引起明显的发病和死亡，死亡率为100％， 剖检可见肝脏出现明显坏死灶(图2A)，脾脏肿大坏 275～277 [3]林锋强，胡奇林，欧阳岁东，等．番鸭呼肠孤病毒oB和dNS基因 死(图2B)，胆囊肿大，其它脏器无明显变化。 克隆及序列分析．中国预防兽医学报，2006．28(6)：672～675 [4]郑腾，曹治云，张志灯．我国番鸭呼肠孤病毒病的研究现状．畜 参考文献 牧与兽医，2005．37(8)：52～54 [1]Y．M Saif主编．禽病学(第十一版)，苏敬良，高福，索勋主译 [5]赵继勋，张国中，苏文良．2008鸡重要疫病的流行动态分析．中 北京：中国农业出版社，2005，309--327 国家禽，2008，30(8)：50～53 鸡a干扰素／白细胞介素2嵌合基因的构建、 融合表达及生物学活性研究 闫若潜+，谢彩华，赵雪丽，张志凌，张健，盛敏，吴志明一 (河南省动物疫病预防控制中心，郑州450008) 前言： 鸡病毒性疾病种类多、危害大，当前缺乏高效广 (NDV)和禽流感H9N2病毒(AIVH9N2)的抑制活 谱的抗病毒药物可用；a干扰素(interferon性以测定其在鸡胚内抗病毒活性。分别测定 alpha， IFN—Q)具有广谱的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节活性； 白细胞介素一2(interleukin一2，IL．2)能诱导T、B淋巴疫苗的免疫增强作用以测定其在鸡体内的抗病毒活 细胞增殖、增强NK细胞活性，可增强机体细胞免疫 性及ChlL．2蛋白的疫苗免疫增强活性。 和体液免疫应答，具有广谱抗病毒和抗肿瘤活性。 结果与分析： 为了研制高效、广谱、无残留、不产生耐药性的基因 工程复合抗病毒药物，本研究进行了鸡a干扰素／白 细胞介素2嵌合基因的构建、融合表达及生物学活 性研究。 材料与方法： 300个氨基酸，插入方向正确，核苷酸序列无变异。 采用重叠延伸PCR(SOE．PCR)方法将鸡a干 35．9 扰素(ChlFN—a)和吼儿．2成熟肽基因序列通过kD，与预期大小相一致；蛋白经纯化后纯度在 一基因柔性linker连接，构建重组嵌合基因 (ChIFN-口．1inker，Ch见一2)并 克 隆， 将 细胞上具有明显抗病毒活性，其抗VSV活性单位 ChIFN-a—linker一劬儿．2阳性重组质粒亚克隆人(9。36×10 毒效价(4．09×105 pQE一30原核表达载体，筛选阳性重组质粒进行 IU／mg)。最低剂量为250pg的 IPTG诱导表达。采用自行创新的融合蛋白纯化方 法分别对表达的三个重组蛋白(rChIFN—a、rChIL．2、有明显的增殖活性，增殖活性随剂量的增加逐渐增 rChlFN—a．1inker—ChlL．2)进行纯化。采用细胞病变 抑制法分别检测rChIFN．a—linker．ChlL一2蛋白、单抗发生特异性免疫反应，计算rChlFN—Ct—linker． rChIFN．a蛋白在CEF细胞上抗水泡性lZl炎病毒ChIL一2蛋白中ChlL．2蛋白的相对含量约为8．12× ELISA试验方 (VSV)活性；采用M1vr法和ChlL，2 法分别检测rChlFN．a．1inker—ChIL一2蛋白对ConA鸡胚内可明显减轻NDV强毒株和H9N2毒株所引 刺激的鸡T淋巴细胞增殖活性和与抗ChlL一2单抗起的胚体出血，并能显著延长鸡胚