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脑微血管内皮细胞上有机阴离子转运多肽2 对丙戊酸钠转运的研究 重庆医科大学附属儿童暇院神经内科(400014)郭艺蒋莉 microvascularendothelial C摘要]目的以体外培养的鼠脑微血管内皮细胞(brain ceils，BMECs)作为BBB的体外模型， 研究鸯视翳裹予转运多肽2(OrganicAnionTransporting drugs， mill、10mill、20rain、30rain、60 5蛳韵臁、100Ftg／ml、200瓣g／mD及孵弯时闯(2 (BMECs，3．870+0．1701．tg／lag O。01)； (3)Oatp2抑制剂可显著抑制BMF_℃s慰VPA的吸收(O．888±O．284．g／ptg 上Oatp2可介导VPA向细胞内的转运，0alp2的表达变化将影响VPA的脑内浓度。 癫痫是神经系统常见疾病，哥前首选和主要的治疗手段仍然楚抗癫痫药物(AEDs)治疗，但经正规 治疗仍然有约30％的患者不能有效控制发作而呈现耐药现象。近年来的研究发现脑内AEDs浓度低于有效 Transporting 材料与方法 折试勰盒、质控盒、标准睦线盒(美国Abbott公司) ：、细胞培养及Oatp2表达检测 1．BMECs培养参照本组前鬏实验采惩组织块贴块法培养BMECs。 2．脑成纤维细胞培养对陈勇兵等的方法加以改进，以差速贴壁法(差速贴壁90min)培养脑成纤维 细胞。 参照本组前期实验采用Western 3．培养细胞上Oatp2表达检测 脑成纤维缨胞上Oatp2蛋白及mRNA表达。 兰、BMECs上Oatp2对VPA转运的关系确认 倾去培养基。用Hank’S液洗3次，加入2mlHank’s液，374 置37。c温浴至完全融解，如此反复4次以破碎细胞。留取上清，离心后蒋次收集上清，送本院血药浓度 一260— 分析宣由专人采用荧光偏振法测定vPA浓度。拽留瓶中的细胞及离心后沉淀物质用前述细胞蛋白提取方 法提取细胞蛋白，并用BCA法测定蛋白浓度。血个浓度．每个浓度重复二扶。 20rain、30aria、60mln，其余步骤参照上述实验。五个时间点，备重复三次 6 vPA溶液，37C，5％c02孵箱孵育30min 3底物蓄积实验将BMECs、成纤维细胞分别与5叩咖l 后测定两种细胞内vPA浓度。并重复实验三次。 4 VPA 6 C，5％C02孵箱孵育30min，测定细胞内VPA浓度。并重复二次。 椿藏及lmg／训地高辛溶液．37 005为有统计学差异。 结 果 二、BMECs上09Ⅲ2对VPA的转运 1 BMEcs对vPA的吸收与孵育时间的关系； (圈4)，故选取孵育3嘶曲为固定时间点进行后续实验。 1 2 kDa —86 —一 一45 鬯 图i RT 圈1 w∞咖Blot检测BMECs(条带1)、 成纤维细胞(豢带2)上O唧2表达 (条带3)上。咖2一mRNA表达 纰№为梭彤戏多突起r胞体较大，边缘光蒲，细胞间排列 细胞早多角形或短檀％．单层J仨K．型Ⅸtt铺路_”Ⅱ