携带人生长抑素2型受体的腺病毒载体的构建和表达.pdfVIP

堡生型 盍 ! 』 型 !Pathophysiology2006，22(10)：1997—2001 · 1997 · [文章编号】 1000—4718(2006)10—1997—05 携带人生长抑素2型受体的腺病毒 载体的构建和表达 徐 彬 ，徐 浩 ， 李月琴 ， 曹忠健 ， 张 欣 ， 周天鸿。△ (暨南大学 ’生物工程学系，第一附属医院核医学科，广东广州510632) [摘 要] 目的：构建表达SSTR2的重组腺病毒载体，用于胰腺癌的基因治疗。方法：构建重组腺病毒穿梭质 粒pDC316一SSTR2，通过脂质体与腺病毒骨架质粒 pBHGlox(delta)El，3Cre共转染293细胞 ，经位点特异性重组获 得重组腺病毒Ad—SSTR2。通过PCR鉴定Ad—SSTR2。经293细胞扩增，纯化制备高滴度病毒感染液。以病毒感 染液感染人胰腺癌细胞capan一2，应用免疫印迹检测 SSTR2蛋白的表达。结果：成功构建腺病毒穿梭质粒 pDC316 一 SSTR2，与pBHG|ox(delta)El，3Cre共转染293细胞获得了重组腺病毒Ad—SSTR2，以Ad—SSTR2基因组 DNA为 模板同时扩增出了人 SSTR2cDNA基因片段和腺病毒骨架基因片段。Ad—SSTR2感染 capan一248h后，免疫印迹 检测到SSTR2蛋白的表达。结论：表达人 SSTR2的重组腺病毒载体构建成功，并在胰腺癌细胞中得到正确表达，为 SSTR2基因治疗胰腺癌奠定了基础。 [关键词] 受体，生长抑素；腺病毒科；基因疗法；癌 [中图分类号] R363 [文献标识码] A Constructionand expression ofrecombinantadenovirusvectorencoding human somatostatinreceptortype2 XU Bin。 XU Hao ，LIYue—qin。 CAOZhong—jian。，ZHANGXin。，ZHOUTian— ， ， hong。 (DepartmentofBioengineering，DepartmentofNuclearMedicine，TheFirstAffiliatedHospital，JinanUnive~hy，Guang- ztwu510632，China．E—mail：tab@’ “。edu．cn) [ABSTRACT] AIM：Toconstructrecombinantadenovirusvectorcarryingthegeneofhumansomatostatinreceptor type2(SSTR2)forgenetherapyofpancreaticcarcinoma．METHODS：SSTR2cDNAwasinsertedintoadenovirusshuttle plasmidpDC316，namedpDC316一SSTR2．pDC316一SSTR2wascotransfectedwithrescueplasmidpBHGlox(delta)El， 3Creinto293cellsbylipo somereagent．Ad—SSTR2wasgeneratedbysite—specificrecombinationandconfirmedbyPCR． Ad—SSTR2waspropagatedin293cellsandpurified．Thetiterofviralstockwasdeterminedbyend—pointdilutionassay． WesternblottingWas usedtodetemr inetheexpressionofSSTR2proteinafterhumanpancreaticcracinomacellcapan一2Was infectedwithrecombinantadenovirns．RESULTS：pDC316一SSTR2wassuccessfullyconst