荧光分析法35363.pptVIP

仪器分析 第十一章 荧光分析法 第一节 基本原理 一、分子荧光 （一）分子荧光的产生 1．分子的电子能级与激发过程 ? = hc ?E S0 S1* T1* 电子能级的多重性 M＝2s＋1 吸收 振动驰豫 荧光 内转换 外转换 磷光 体系间跨越 （二）激发光谱与发射光谱 excitation spectrum ? 横坐标?ex，纵坐标 发射光强度 fluorescence spectrum ? 横坐标?em，纵坐标 发射光强度 溶液荧光光谱的特征 Stokes shift 荧光光谱的形状与激发波长无关 荧光光谱与激发光谱的镜像关系 二、荧光与分子结构 荧光寿命(?f)和荧光效率 (?f) Ft = F0 e -t /?f ln F0 Ft ? f = 发射荧光的光子数 吸收激发光的光子数 一般物质 ? f 0~1之间 有机化合物分子结构与荧光的关系 长共轭结构 刚性和共平面性 取代基 荧光试剂 荧光胺 Dansyl-Cl 邻苯二甲醛(OPA) 测定无机离子的荧光试剂 三、影响荧光强度的外部因素 温度 溶剂 pH值 荧光熄灭 散射光 极性溶剂 溶剂粘度 瑞利散射 拉曼上式 荧光熄灭剂 荧光自熄灭 选择适当的激发波长可消除拉曼光的干扰 第二节 荧光定量分析方法 一、荧光强度与物质浓度的关系 F=K’(I0-I) I=I010-ECL F= K’I0(1-10-ECL) = K’I0(1-e-2.3ECL) 若c很小，Ecl ≤0.05 则 F=2.3K’I0Ecl=Kc F=2.3K’I0ECl=KC ECl≤0.05 F ? C ECl 0.05 F 与C不成正比 荧光分析法的灵敏度高于紫外-可见分光光度法 F A= - lgT = - lgI /I0 荧光法 紫外法 二、定量分析方法 1.标准曲线法 2.比例法（对比法） 3.多组分分析—多组分分析 用空白溶液调零 用标准溶液调满刻度 第三节 仪器与其他荧光分析技术 一、荧光分光光度计 滤光片荧光计 滤光片—单色器 荧光分光光度计 仪器的校正 灵敏度 波长 激发光谱和荧光光谱 以能被检出的最低信号来表示 在选定条件下用稳定荧光物质校正 用汞灯标准谱线校正 双光束仪器时，误差可抵消 二、其他荧光分析技术简介 1.激光荧光分析 2.时间分辨荧光 3.同步荧光分析 4.胶束增敏荧光 仪器分析 第十一章 荧光分析法