半枝莲总黄酮诱导人肝癌细胞Bel-7402凋亡的研究.pdfVIP

半枝莲总黄酮诱导人肝癌细胞Bel．7402凋亡的研究 余建清1，尹艳1，柳急斌1，邹国林2胡先明1 (1．武汉大学药学院，湖北武汉430072； 2．武汉大学生命科学学院，湖北武汉430072) f摘要】 目的t研究半枝莲蓉黄酮对人肝癌Bel-?402细胞体外增殖的抑糊作用及凋亡的诱导作用．方 法：采用Ⅲ阿法测定对细胞生长的抑制辜；荧光显徽镜法观察细胞形态改变、琼脂糖凝胶电泳法观察DNA 梯状条带、流式细胞术检测细胞凋亡率．结果：总黄酮对Bel-7402细胞有较强的抑制作用I诱导细胞出 p 现明显的形态学改变，琼腊糖凝胶电泳出现典型的DNA梯状条带，流式细胞术检测经30E·吐。’总黄酮 处理的细胞，凋亡事为16．58％．结论；息黄酮能诱导Bei-7402细胞凋亡，有明显的剂量、时闻依赖性． 【关键词]半枝莲总黄酮lBel一7402细胞；凋亡 半枝莲SoutellarfnbarlⅪta D．Don系唇形科黄芩属植物，主产于江苏、江西、福建、 广东、广西等地．具有清热解毒、利尿消肿、散瘀止血之功效。临床用于多种癌症的治疗， 以半枝莲为君药制成的多种制剂在治疗直肠癌、食道癌、肺癌、胃癌、肝癌等方面取得了显 著疗效“’“．半枝莲化学成分研究始于20世纪70年代，文献报道的化合物类型主要为黄酮， 萜类和甾体类。药典对半枝莲药材中的总黄酮含量有明确的规定，半枝莲的药效可能与总黄 酮的含量有关。因此，对半枝莲总黄酮进行了提取及纯化．对其抗肿瘤作用进行了研究． 细胞凋亡又称程序性细胞死亡，是一种由基因控制的细胞自主性死亡方式．细胞搞亡通 过清除多余的细胞而在各种生理过程中发挥作用，同时多种疾病的发生也与细胞凋亡紊乱有 关。随着对肿瘤发病机理的深入研究。有关细胞增殖凋亡失衡在肿瘤发生中的作用日益受到 人们的重视。本研究从诱导肿瘤细胞凋亡的角度探讨了总黄酮的抗肿瘤机制。从而为其临床 应用提供理论依据． 1材料和方法 1．1材料 MTT(噻唑蓝)．Hoechst33258，蛋白酶K。P【Naseh，溴化丙啶(PI)均购自Sigma公司t RP自tI一1640培养基购自Gibco公司；新生小牛血清购自杭州四季青公司．半枝莲总黄酮为武 汉大学药学院天然药物化学教研室制备，纯度为46．28％．FAcS c∞型流式细胞仪(美国)： LEIChDML Thermo荧光显微镜．人肝癌细胞Bel-7402由武汉大学中国典型培养物保藏中心 提供，用含10％热灭活新生小牛血清的RPMI-1640培养基在37℃，5％c如孵箱中培养。 1．2方法 1．2．t细胞毒实验取对数生长期的人肝癌Bel吖402细胞悬液，接种在96孔板，细胞数 为5×lOS／孔，常规培养于含10％小牛血清、100 p U·_L_‘青霉素和100g·mL-l链霉素的 RPMI一1640培养液中，37℃，5％c02条件下培养24h后，分别加入不同浓度的总黄酮，对 照孔加入含0．1％DMSO培养基．继续孵育48 h，实验终止前4h加入，5mg·=L-1啪可液20 p 100u L，孵育结柬时，弃上清液，加入DMSO L，震荡器震荡摇匀，在570¨处测定吸 光度CA)值。 1．2．2细胞形态学观察细胞爬片后，加入不同浓度的总黄酮作用48h，PBS洗涤．甲 p 醇一冰醋酸(3：1)固定，Hoechst33258(50 g·mL-1)染色，吸一滴封片液于载玻片上， 加盏玻片．荧光显微镜观察，摄片． I．2．3琼脂糖凝胶电泳法不同浓度的总黄酮作用Bel-7402细胞48h后．收集细胞， 加入lIL细胞裂解液、10H p L蛋白酶K