Tim-1与Tim-3在原因不明习惯性流产中的表达及意义.pdfVIP

山东医药2009年第49卷第 3期 Tim一1与Tim一3在原因不明习惯性流产 中的 表达及意义 吕红娟 ，朱海峰 。宋永红 ，马春红’ (1山东大学医学院免疫研究所，山东济南250012；2山东省血液中心) [摘要] 采用实时荧光定量PCR(RT—PCR)法检测35例原因不明习惯性流产 (URSA)患者外周血单个核细胞 (PBMC)中T细胞免疫球蛋白黏蛋白．1(Tim．1)和T细胞免疫球蛋 白黏蛋白_3(Tim-3)mRNA的表达水平，并与25 例查体健康的妊娠中期孕妇作比较。结果 与健康孕妇相比，URSA患者Tim一1和Tim-3mRNA的相对表达量均明 显增多(P均 0．O1)。提示URSA患者体内rI’h细胞免疫应答水平较高，Tim分子可能参与URSA发生、发展。 [关键词] 习惯性流产 ；T细胞免疫球蛋白黏蛋白-1；T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3 [中图分类号] R714．21 [文献标识码] B [文章编号] 1002-266X(2009)03-0102-02 从免疫学观点看，妊娠相当于HLA半相合同种 扩增反应体系总体积2O ，其中上、下游引物(浓度 异体移植。正常妊娠时，机体暂时处于对父方异体 调整为 10nM)各 0．4 l，SYBRPremixEXTaq7．5 抗原的特异性耐受状态，其可能机制之一是胎盘产 ， calibrationDye2 l，cDNA2 ，灭菌水 5．2 l。 生细胞因子和激素，使T细胞失活或向Th2反应偏 RT—PCR扩增条件：95℃预变性 10min；95℃ 15s， 移…。近年来大量研究表明，Thl／Th2细胞因子平 6O℃ 1min，重复4O个循环。融解曲线设定：95oC 衡与妊娠结局关系密切 J。T细胞免疫球蛋白黏 预变性2min；95oC15s，60oC1min，重复2个循 蛋 白．3(Tim-3)选择性表达于活化 Thl细胞表面， 环 。结果各 目的基因的融解 曲线均为单峰，表明无 在Thl细胞介导的免疫应答中起负调节作用 。 非特异性扩增。每份标本分别同时用 8一actin、Tim一 T细胞免疫球蛋 白黏蛋 白一1(Tim一1)主要表达于活 1、Tim-3的引物进行ReahimeRT—PCR，重复3次，得 化Th2细胞上，可调节T细胞的增殖和分化并可抑 到Ct值取平均值。Tim．1、Tim一3mRNA的相对表达 制外周免疫耐受形成 。2007年 1～11月，我们检 量以它们各 自ACt与B—action的ACt比值表示。 测了35例原因不明习惯性流产 (URSA)患者外周 1．2．2 统计学方法 采用SPSS11．0软件。实验数 血单个核细胞 (PBMC)中Tim一1、Tim一3mRNA水平， 据以x±s表示，样本差异显著性检验采用成组设计 旨在探讨其在 URSA发病中的作用 。 t检验，检验水准 Or．=0．05。 1 资料与方法 2 结果 1．1 一般资料 研究对象为35例确诊的URSA患 对照组与观察组 PBMC中Tim一1水平分别为 者(观察组)，年龄 23～34岁，流产次数 2—5次。 1．25±0．07、1．34±0．09，Tim一3mRNA为 1．22± 另选无不 良妊娠史健康中期妊娠妇女25例作为对 0．13、1．28±0．06，P均 0．01。 照组，年龄23～31岁。 3 讨论 1．2 方法 URSA是指排除了所有已知引起流产原因，连 1．2．1 Tim．1、Tim一3mRNA表达检测 两组均抽取 续3次或3次以上的反复早期 (怀孕20周 内)流 外周血2ml，ACD抗凝，密度梯度离心法分离 PB- 产，其病因及发病机制尚不清楚。多数学者认为与 MC，以Trizol法抽提总RNA。将RNA反转录为cD—