濒危竹种小蓬竹（Drepanostachyum luodianense）RAPD-PCR反应体系优化.pdfVIP

浙江农业学报ActaAgriculturaeZhejiangensis，2014，26(3)：667~74 http：／／www．zjnyxb．an 刘济明，王敏，闫国华 ，等．濒危竹种小蓬竹 (Drepanostachyumluodianense)RAPD—PCR反应体系优化[J]．浙江农业学报， 2014，26(3)：667—674． DOI：10．3969／j．issn．1004—1524．2014．03．23 濒危竹种小蓬竹 (Drepanostachyumluodianense)RAPD-PCR 反应体系优化 刘济明，王 敏，闫国华，赵小鹏，文 萍，池 馨，颜 强，李 鹏 (贵州大学 林学院，贵州 贵阳550025) 摘 要：为了建立小蓬竹 (Drepanostachyumluodianense)RAPD-PCR反应的最优体系，以小蓬竹基因组DNA 为模板 ，对影响其 RAPD扩增的dNTPs浓度、模板DNA浓度、TaqDNA聚合酶量 、引物浓度、Mg“浓度等重 要参数进行了单因子和正交试验。试验得 出小蓬竹 RAPD最优反应体系为：20txL反应体系 ，10×PCR buffer为 1／10体积 ，dNTPs为 100txmol·L～，模板 DNA量为30ng，TaqDNA聚合酶为 1．0U，引物浓度为 0．2Ixmol·L～，Mg 浓度为 1．5mmol·L～。优化后的RAPD—PCR反应程序为 ：94℃预变性5min，然后进 入35个循环 ，即94℃变性 1min，35℃退火30S，72qC延伸90S，循环完毕后于72℃延伸7min，最后在4℃ 保持。 ， 关键词：小蓬竹；RAPD—PCR；引物；dNTPs；TaqDNA聚合酶 中图分类号：S795 文献标志码：A 文章编号：1004—1524(2014)03-0667-08 OptimizationofRAPD-PCRconditionsforarareandendangeredbambooofDrepanostachyum luodianense LIUji—ming，WANGMin，YANGuo—hua，ZHAOXiao—peng，WENPing，CHIXin，YANQiang，LIPeng (CollegeofForestry，GuizhouUniversity，Guiyang550025，China) Abstract：TheDrepanostachyum luodianenseRAPD—PCR reactionsystem wasoptimizedfortheanalysisofgenetic variationandstructureofD．1uodianense．ThegenomicDNA ofD．1uodianensewasextractedbyimprovedCTAB method．Then，bothsinglefactortestandorthogonaldesignwereappliedtostudytheeffectsofmainfactorsonthe RAPD—PCR system ofrD．1uodianense，inwhichthemainfactorsincludedtheconcentrationofdNTPs，primersand Mg“． ThecontentoftemplateDNA andTaqDNA polymeraseandanoptimal20 IxLRAPD—PCR reactionsystem for D．1uodianensewasestablished，including1／10volume10 ×PCR buffer，100 txmol·L～ dNTPs，30 ngtemplate DNA，1．0 U TaqDNA polymerase，0．2 Ixmol·L一 primersand1．50mmoi·L一 Mg ．Theoptimizedreaction prog