骨髓间充质干细胞条件培养液对心肌梗死后细胞凋亡影响.pdf

骨髓间充质千细胞条件培养液对心肌梗死后细胞凋亡的影响 中文摘要 骨髓间充质干细胞条件培养液对心肌 梗死后细胞凋亡的影响 中文摘要 目的：经心导管用明胶海绵栓子栓塞猪的冠状动脉左前降支(LAD)，建立心肌 梗死的模型。在心梗后75分钟、4N心导管介入术经冠状动脉注射等量的骨髓间充质 液、干细胞对心肌细胞凋亡的影响，对可能其机制进行初步探讨；并对条件培养液中 能减轻心肌细胞凋亡的细胞因子成分进行初步分析。 方法：梅山猪30头，随机分为6组t75分钟组：A组：对照组，心梗后75分 75分钟组，心梗后75分钟移植MSCs；C组： 钟注射培养基(DMEM)；B组：MSCs MSC．CM MSC．CM4 4周注射DMEM；E组：MSCs4周组，心梗后4周移植MSCs；F组t 周组，心梗后4周移植MSC．CM。应用明胶海绵栓塞LAD，建立心梗模型。采用密 x107／5 度梯度离心与贴壁筛选相结合的方法分离纯化、体外扩增MSCs。干细胞(1 前、移植后、移植后4小时，4周组分别于心梗前、移植后、移植后2周、4周，行 Powerlab检查，评估心功能；组织学观察各组移植细胞的情况，测算心梗面积，免疫 周组心肌标本行Ⅷ因子免疫组化检测新生血管密度。Westernblot检测75分钟组细 胞凋亡产物active caspase caspase3蛋白表达。采用ELISA方法检测MSC．CM的细胞因子。 结果：心梗75分钟组：(1)移植后，MSC．CM75分钟组与对照组、MSCs75分 75 分钟组8．OHdG与对照组、MSCs 75分钟组active 75分钟组相比 caspase3、phospho．SMAD2蛋白表达与对照组、MSCs (4)MSC．CM 明显减少(脚．05)； 75分钟组心梗面积减少。心梗4周组t(1)移 I 骨髓间充质干细胞条件培养液对心肌梗死后细胞凋亡的影响 中文摘要 植后，MSCs4周组与对照组、MSC-CM 等指标明显降低(尸O．05)；(2)MSCs4周组active3蛋白表达与对照组、 caspase MSC．CM (3)Ⅷ因子免疫组化示：梗死交界区新 4周组相比明显减少(尸O．05)； 4周组与对照组、MSC．CM4周组相比明显升高(尸0．05)；(4) 生血管的密度，MSC MSCs 4周组心梗面积减少。MSC．CM中可检测到VEGF、HGF等细胞因子。 结论：1、急性心肌梗死后，骨髓间充质干细胞条件培养液能减少梗死区心肌细 胞caspase 机制可能是通过减少梗死区心肌细胞的氧化应激和TGF．B的分泌两条途径，从而减 轻梗死区心肌细胞凋亡；2、骨髓间充质干细胞可能通过增加新生血管的数量，改善 3蛋白分子在心肌细胞的表达，从而减轻心肌细 梗死区的供血、供氧，抑制caspase 胞的凋亡，改善心功能；3、心肌梗死急性期移植骨髓间充质干细胞条件培养液能明 显的减轻心肌细胞凋亡，其效果要优于干细胞移植；慢性心肌梗死期，干细胞可能通 过增加梗死区新生血管密度等机制改善细胞凋亡，效果较移植培养液显著；4、骨髓 间充质干细胞条件培养液对心肌凋亡的影响，可