HCMV重组嵌合抗原表达质粒构建及免疫反应的初步鉴定.pdfVIP

· 752 · 安徽 医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Jun；49(6) HCMV重组嵌合抗原表达质粒构建及免疫反应的初步鉴定 曾宪聪 ，汪小五 ，陈 伟 ，王林定 摘要 目的 选用人巨细胞病毒 (HCMV)抗原性强且亲水 1 材料与方法 性较高片段构建融合抗原表达质粒，诱导其表达，纯化 目的 蛋 白；并初步鉴定其免疫反应性。方法 通过 Protean软件 1．1 材料来源 pQE．80L、菌株BI21(DE3)由本实 分析了HCMVUL32、UIA4、UL83序列，设计合理引物；各基 验室保存。 因片段用Overlap方法连接，并引入 BgllI、BamHI酶切位 1．2 主要试剂 PstI、Bgl11、BamHI、SalI购 自 点，使之可通过酶切与质粒pQE一80L连接。重组质粒转化入 日本 TaKaRa公司；PVDF膜购 自上海生物工程有限 感受态BL21(DE3)菌株，经 PCR、酶切鉴定 目的基因后再诱 公司；Nin．NTA亲和层析柱购 自美国GE公司；50 导、表达、纯化，获得 目的蛋白，采用Westernblot法检测免疫 ml亲和层析预装柱购 自上海生物工程有限公司； 反应性。结果 诱导后的重组菌pQE80一L—UL32一UIA4一UL83 HRP标记山羊抗人 IgG购 自北京中杉金桥生物技 经十二烷基硫酸钠 一聚丙烯酰胺凝胶 电泳 (SDS—PAGE)证 术有限公司；ECL化学发光试剂盒购 自瑞士Thermo 实蛋白表达在包涵体。纯化后获得大小约为52ku的 目的 公司。 蛋白，采用 Westernblot法检测证实重组嵌合抗原能与HC— 1．3 重组表达质粒的构建 MV阳性血清有反应。结论 构建了重组嵌合抗原表达质 1．3．1 HCMV抗原片段 引物设计 利用 Protean软 粒，并诱导、表达、纯化获得 目的蛋 白。Westernblot法鉴定 件分析了UL32_5-6]、uL44[、UL83Is-9]、氨基酸序 嵌合抗原是HCMV特异性抗原且有免疫反应性 。 关键词 人巨细胞病毒；重组融合抗原 ；免疫反应性 列，抗原性强且亲水性好的片段 。分析 了 UL32、 uL44、UL83氨基酸序列。选择 UL32A(372aa～ 中图分类号 R373．4 文献标志码 A 文章编号 1000—1492(2014)06—0752—05 442aa，213 bp)UL32B (522aa～552aa，93 bp)、 UL32C(705aa～727aa，69bp)；UIA4选择2个片段 ， 人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus，HCMV) 分别为 UIA4A(1aa～40aa，120bp、)UI44B(403aa 又称为人疱疹病毒5型，属B一疱疹病毒亚科，HCMV ～ 421aa，57bp)；UL83选择 3个 片段，分别 为 感染极为普遍，在育龄期妇女中感染率可达95％以 UL83A(169aa～271aa，309bp)、UL83B(361aa～ 上 ¨ J。此外，HCMV感染可通过胎盘侵袭胎儿引 478aa，354bp)、UL83C(535aa～561aa，81bp)。选 起先天性感染，少数造成早产、死产或生后死亡 J。 取在蛋 白质 N端和 c端之间的区域，Jameson．wolf 母婴感染HCMV的快速诊断对于决定是否保留胎