mRNA差异显示分离棉花抗旱耐盐基因的相关cDNA片段.pdfVIP

维普资讯 新 疆 农 业 大 学 学 报 2007，30(4)：72～75 JournalofXinjiangAgriculturalUniversity 文章编号：1007—8614(2007)04—0072—04 mRNA差异显示分离棉花抗旱耐盐 基因的相关 cDNA片段 聂新辉 ，曲延英 ，尤春源 ，陈全家 (新疆农业大学 农学 院，乌鲁木齐 830052) 摘 要： 采用 mRNA差异显示(DDRT—PCR)技术 ，对抗旱、耐盐棉花品种 (品系)分别进行 25 PEG 和 1．3 NaCI胁迫诱导，利用优化 的蛋 白酶 K法分别提取胁迫与非胁迫棉花叶片中的总 RNA，以此为模板 ，选用 12个锚 定引物和2O个随机引物的240个组合进行 RT—PCR，产物经 6 变性聚丙烯酰胺凝胶 电泳后银染，共获得 88条差 异条带，二次 PCR扩增 ，选择 出 41条表达稳定 的差异条带 。 关键词： DDRT—PCR技术 ；抗旱 ；耐盐 ；蛋 白酶 K法 ；聚丙烯酰胺凝胶 电泳 中图分类号 ： $332．1 文献标识码 ：A Isolation ofcDNA FragmentRelatedtoCottonResistanceto DroughtandSaltGenesbymRNA DifferentialDisplay NIEXing—hui，QUYan—ying，YOU Chun—yuan，CHEN Quan—jia (CollegeofAgronomy，XinjiangAgriculturalUniversity，Urumqi，830052) Abstract： UsingmRNA differentialdisplay(DDRT-PCR)，thecottonvarietyofresistancetodroughtand saltistreatedseparately by 25 PEG6000and 1．3 NaC1．ThetotalRNA ofthetreatedandnon-treated cottonleavesaredrawedseparatelybyusingthewayofimprovedproteinase—K pathway．The240combi— nationswhich areestablishedby 12anchoredprimersand20arbitraryprimersareconductedbyRT-PCR ， theproductsareappliedbythemethodofsilver—stainingwith6％ PAGE．88differentdisplayedfragments areobtained，and41ofwhicharepickedupbythesecondPCR． Keywords： DDRT—PCR technique；resistancetOdrought；resistancetosalt；proteinase—K pathway；Pol— ypropylenegelelectroDhoresis 新疆是我国最大的棉花生产基地，目前全疆耕 基 因 。 地面积 402．55万 hm ，植棉面积约在 126万 hm 。 本研究将采用mRNA差异显示技术，分离出与 干旱和盐渍 问题严重制约着新疆棉花的进一步发 棉花抗旱耐盐有关的 cDNA 片段 ，从棉花中克隆出 展 。随着分子生物技术 的不断发展 ，建立起了一系 抗旱耐盐的基因。 列新的方法 ：DDRT—PCR，RDA，SSH 和 RSDD法 等l】]。其中Liang和 Pardeel992年创立 了mRNA 1 材 料 差别显示 反转 录 PCR(differentialdisplayreverse