去甲斑蝥素通过下调VE-Cadherin和MMP-2_9活性抑制结肠癌血管拟态形成的体外研究.pdfVIP

· 64 · ACTAUNIVER．SITATISTRADITIONISMEDICALISSINENSISPHARMACOLOGIAEQUESHANGHAIVol28No．4ju1．2014 去 甲斑蝥素通过下调 VE—Cadherin和 MMP一2／9 活性抑制结肠癌血管拟态形成的体外研究 侯风刚 李 文 刘见荣 石 齐 吕 祥 任建琳 花宝金 1．中国中医科学院广安门医院肿瘤科 (北京 100053) 2．上海中医药大学附属市中医医院肿瘤科 (上海 200071) 【摘 要】 目的：探讨去甲斑蝥素(NCTD)对结肠癌中血管生成拟态 (VM)形成的作用及其可能的机制。 方法：采用 MTT法检测结肠癌细胞 HCT116对 NCTD的敏感性，筛选无毒剂量；在三维培养基础上观察 NCTD作用后VM的形成情况；采用实时荧光定量PCR(qRT—PCR)方法检测在NCTD干预后细胞内血管内 皮钙黏蛋白(VE—Cadherin，VE—Cd)的mRNA表达水平；WesternBlot检测 NCTD作用后VE—Cd蛋 白表达水 平；采用明胶酶谱法检测NCTD对三维培养的HCT116细胞MMP一2和MMP-9活性的影响。结果：三维培养 下无毒剂量的NCTD能有效地抑制VM形成 ；VE-CdmRNA表达在药物作用后出现明显下调 ；而HCT116细 胞的胞浆和胞膜中VE-cd蛋白均呈下调趋势，胞膜中VE—Cd蛋 白下调更明显；三维培养 的HCT116细胞 MMP一2和 MMP．9活性随着 NCTD药物浓度的增加而逐渐降低。结论：体外实验研究中，NCTD可以有效抑 制结肠癌VM的形成 ，其机制可能与下调VE—cd表达和降低MMP22、MMP一9的活性有关。 【关键词1 去甲斑蝥素；结肠癌 ；HCT116细胞株；血管生成拟态；血管内皮钙黏蛋白；基质金属蛋白酶 【中图分类号】 R285．5 【文献标志码】A 【文章编号】1008．861X(2014)04—0064—06 结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一，在欧美发达 蝥体内提取的活性成分经化学改造后的新型抗肿 国家发病率已高居第2位 J，在我国居于第 3～5 瘤药物，用于治疗肝、肺、结直肠癌等恶性肿瘤。其 位，并有快速增长的趋势 J。术后较高的复发转移 抗肿瘤机制除与诱导凋亡、抑制肿瘤血管生成有关 率和晚期较低的5年生存率是 目前结直肠癌难以突 外…。 ，还可能与抑制肿瘤 VM有关 ¨。本研究基 破 的瓶 颈。近年 来 研 究发 现，血 管生 成 拟 态 于体外实验来探讨NCTD对结肠癌血管拟态形成的 (vasculogenicmimicry，VM)与肿瘤的恶化、复发、转 作用及其可能的机制。 移、耐药以及远期的不 良预后密切相关_3J，包括结 1 材料与方法 直肠癌在 内的多数恶性肿瘤 中均存在 VM 。。 VM是近年来发现的一种全新的肿瘤微循环模 1．1 细胞株和试剂 人结肠癌细胞株 HCT116，由 式，是高侵袭性肿瘤细胞为满足 自身血液供应，通过 上海中医药大学附属普陀医院肿瘤实验室提供。 自身表型重塑和基质重构而形成的一种类血管样管 NCTD，购 自南京泽朗医药科技有限公司；5一FU，购 道 。研究表明，VM形成主要与肿瘤细胞发生表 自上海旭东海普药业有限公司；RPMI．1640培养基 型重塑过度表达血管 内皮钙黏蛋 白(VE．Cadherin， 和胎牛血清，购 自美 国Gibco公司；鼠尾 I型胶原， VE—Cd) 以及MMP一2、MMP一9为主的基质金属蛋 购 自杭州生友生物技术有 限公司；总 RNA提取 白酶的活性增强而使细胞外基质重构有关_l。 TRIzol试剂盒、PCR试剂盒及细胞裂解液 、细胞膜蛋 去甲斑蝥素(norcantharidin，NCTD)是从中药斑 白与细胞浆蛋 白抽提试剂盒，均购 自日本 T