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羧基量子点标记氨基分子的方法 武汉珈源量子点技术开发有限公司经过多年研究，开发出高质量的量子点产品。该系列产品具 有荧光质量高、稳定、耐光漂白、易于生物偶联和荧光标记应用的特点。 带羧基的水溶性量子点（COOH-QDs ）是一种功能化的量子点产品，只需使用简单的交联剂， 通过简便的步骤，就可以很容易地同蛋白、寡聚核苷酸以及其它感兴趣的生物分子结合。 我们设计下面的方案就是为了使用者将珈源公司的产品的应用对象更为广泛和深入，比如：免 疫组化、蛋白交叉实验和其它基于荧光检测的试验。 本方法提供的是羧基量子点（COOH-QDs ）和含伯胺基的分子（NH2-R ）的偶联步骤，该分子 可以是抗体、蛋白、多肽、寡核苷酸探针或NH2-PEG-R 等。 注意：本文中涉及的方法仅仅是一种指导性的方案，并非最优方案。使用者请根据具体情况进 行调整和优化。 试剂和耗材： COOH-QDs （JiaYuanTM W4 或W7 系列产品，浓度8μM） 待标记目标分子 注： 不含除目标分子外的伯胺基分子，如血清、腹水、稳定剂及Tris 缓冲盐等。 建议使用不含缓冲盐的纯分子，可以是干粉，也可以是高浓度溶液。 EDC （偶联剂，如Sigma 公司的 E7750 等，使用时配制成10mg/mL 储备液） 注： 称量时应先将试剂瓶（粉剂，保存于-20 ℃）平衡至室温后开盖，现配先用，不得保存。 硼酸盐缓冲液 （10mM，pH7.4 ，所有其它干粉试剂均用该缓冲配制） 脱盐柱 （GE Healthcare 公司NAP-5 或NAP-10 等型号脱盐柱） 超滤管 （Millipore 公司截留分子量50kDa 或100kDa 的离心式超滤器，视不同体系选择0.5mL、 2mL 或4mL 容量产品） 注： 当目标分子分子量小于60kDa 时，可用100kDa 超滤管纯化；当目标分子大于60kDa 时必须采取尺寸排 阻色谱法纯化。 建议用Superdex G200 （GE Healthcare #17-1043-10）为填料的尺寸排阻色谱柱进行分离纯化，超滤管配 合浓缩样品。 低吸附针头式滤器 （0.22μm 孔径，备选厂家：Millipore 、Pall 、Sartorius 等） 其它：带加热功能的搅拌器，低吸附离心管、样品管等 反应用量： 试 剂 浓 度 摩尔比 备 注 COOH-QDs 8 μM 1 终浓度为1μM NH -R 5-10 mg/mL 10-500 根据实验情况进行优化，一般生物大分子10-50:1，小分子大于100 2 EDC 10 mg/mL 2000-5000 根据实验情况进行优化 电话: 027 传真: 027 E-mail: support@qds.net.cn 地址: 武汉市东湖高新区高新大道666 号“光谷生物城”B6 栋一楼 邮编: 430075 实验步骤： 1、考虑所有试剂用量，扣除量子点溶液、待标记分子和 EDC 的体积，准确计算需要将 COOH-QDs 稀释至 1μM 所需补充的缓冲溶液体积，计为V0 ；取一带搅拌器的圆底烧瓶作为反 应容器，将该缓冲液加入反应器中。 2 、将COOH-QDs 加入到反应器中，开始搅拌。 3、加入待标记分子，继续搅拌至混合均匀（搅拌速度不易过快，以不产生气泡为准。）。 4 、搅拌5min 后，适当调低搅拌速度，加入计算好用量的EDC 溶液（10mg/mL，10mM 硼酸 盐缓冲，pH7.4 ）。 5、继续室温反应2h （若室温较低，可将搅拌式加热器的温度调至25℃）。 6、反应结束，用0.22μm 针头式滤器将样品过滤，或者12000rpm 离心3min 除团聚。 7、产物纯化方案：应根据反应物、待标记目标分子和产物的性质综合制定纯化方案